生命を維持するＤＮＡ複製装置はどのように形成されてきたか～アーキア研究から迫る～

维持生命的DNA复制机器是如何形成的？～从古菌研究走近～

基本信息

批准号：
16J02633
负责人：
永田麻梨子
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

H30年度は超好熱性アーキアThermococcus kodakarensisにおけるDNA複製進行機構についての解析を進めた。これまでの解析では、複製ヘリカーゼMCMはGINSによって活性促進が見られるものの、GAN/Cdc45はヘリカーゼ活性に影響を与えなかった。また、GINSはMCM、GANだけでなく、複製ポリメラーゼ(PolDと推定される)との結合が見られている一方で、PolDとMCM、GANとの結合は検出できていない。PolD存在下でのGAN-MCM-GINS複合体 (GMG)のヘリカーゼとしての機能を調べたところ、PolDとMCMがGINSを介して相互作用することで、MCMのATPase/ヘリカーゼ活性が促進されることを発見した。これは、GMGとPolDが機能的なレプリソーム構成因子であることを示している。T. kodakarensisのgan遺伝子欠損株は高温致死を示すことを以前報告したが (Nagata et al. 2017)、リコンビナントタンパク質を用いたin vitroにおけるヘリカーゼと融合させた高温DNA合成反応もまた、GMG-PolDにおいて機能し、T. kodakarensisの生育温度範囲である60-90°Cにおいて再現ができたことから、in vitro高温DNA複製系の確立にとってGANは重要な役目を果たすと考えられる（Nagata et al. in preparation）。また、DNA複製進行中に露出した一本鎖DNAを保護すると考えられるReplication protein A(RPA)とレプリソーム構成因子の相互作用を調べたところ、PolDとの特異的な相互作用およびPolDのDNA合成活性の促進が見られた。この促進は、RPAが鋳型DNAの二次構造をほどくことで、PolDのDNA合成活性を補助する働きにも由来すると考えられる（Nagata et al. 2019）。

2019财年，我们对超嗜热古菌Thermococcus kodakarensis的DNA复制进程机制进行了分析。先前的分析表明，GINS 促进复制解旋酶 MCM 的活性，但 GAN/Cdc45 对解旋酶活性没有影响。此外，虽然已观察到 GINS 不仅与 MCM 和 GAN 结合，而且还与复制聚合酶（推测为 PolD）结合，但尚未检测到 PolD 与 MCM 和 GAN 之间的结合。我们研究了 GAN-MCM-GINS 复合物 (GMG) 在 PolD 存在下作为解旋酶的功能，发现 PolD 和 MCM 之间通过 GINS 的相互作用促进了 MCM 的 ATP 酶/解旋酶活性。这表明 GMG 和 PolD 是功能性复制体组件。我们之前报道了 T. kodakarensis gan 基因缺陷菌株表现出高温致死性（Nagata et al. 2017），但体外使用与解旋酶融合的重组蛋白进行的高温 DNA 合成反应也表明，GMG-PolD 是可以在 60-90°C 的 T. kodakarensis 生长温度范围内重现这一点。 GAN被认为在建立体外高温DNA复制系统方面发挥着重要作用（Nagata等人正在准备中）。此外，我们研究了复制蛋白A（RPA）和复制体构成因子之间的相互作用，RPA被认为可以保护DNA复制过程中暴露的单链DNA，并发现与PolD和DNA合成活性之间存在特异性相互作用。 PolD 被认为得到了晋升。这种提升被认为是由于 RPA 通过解开模板 DNA 的二级结构来协助 PolD 的 DNA 合成活性的作用 (Nagata et al. 2019)。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

生物化学分野研究室HP

生化实验室HP

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

極限環境でDNA複製の安全管理を行うCdc45/RecJファミリーの機能解明

阐明 Cdc45/RecJ 家族在极端环境下安全控制 DNA 复制的功能

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Possible function of the second RecJ-like protein in stalled replication fork repair by interacting with Hef

第二个 RecJ 样蛋白通过与 Hef 相互作用修复停滞复制叉的可能功能

DOI：
10.1038/s41598-017-17306-0
发表时间：
2017
期刊：
影响因子：
4.6
作者：
Nagata Mariko;Ishino Sonoko;Yamagami Takeshi;Simons Jan;Kanai Tamotsu;Atomi Haruyuki;Ishino Yoshizumi
通讯作者：
Ishino Yoshizumi

Atomic structure of an archaeal GAN suggests its dual roles as an exonuclease in DNA repair and a CMG component in DNA replication.

古细菌 GAN 的原子结构表明它具有双重作用：DNA 修复中的核酸外切酶和 DNA 复制中的 CMG 成分。

DOI：
10.1093/nar/gkw789
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
0
作者：
Oyama; T.; Ishino; S.; Shirai; T.; Yamagami; T.; Nagata; M.; Ogino; H.; Kusunoki; M.;Ishino; Y.
通讯作者：
Y.

Euryarchaea-specific RecJ-like protein may work in stalled fork repair with Hef.

广古菌特异性 RecJ 样蛋白可能在 Hef 修复停滞叉中发挥作用。