エピゲノムマーキングによるキスペプチン発現制御メカニズムの解明

通过表观基因组标记阐明 Kisspeptin 表达的控制机制

基本信息

批准号：
14J10751
负责人：
後藤哲平
金额：
$ 1.47万
依托单位：
National Institute for Physiological Sciences (2015)Nagoya University (2014)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-25 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

視床下部サンプルにおけるエンハンサー特異的なヒストン修飾のクロマチン免疫沈降解析を行い、UCSCゲノムブラウザーへマッピングを行った。その結果、マウスゲノム上に1000-2400カ所程度のエンハンサー特異的ヒストン修飾の豊富な領域があることがわかった。一方、これら領域にはKiss1遺伝子座は含まれていなかった。ARCのKiss1遺伝子エンハンサー候補領域10 kb内を詳しく調べると、ARCサンプルではエンハンサー特異的ヒストン修飾を受け、なおかつAVPVサンプルでは修飾を受けていない領域が存在していた。しかし、マッピングされたシグナルの絶対数が少なく、真のシグナルかどうか判断が困難であった。その原因はサンプルがキスペプチンニューロン以外の細胞を多く含んでいるためであると考えられる。そこで、キスペプチンニューロンに緑色蛍光タンパクを発現するKiss1-GFPマウスの胎児視床下部を初代培養しSV40T-antigenによって不死化を試みた。一度継代後、SV40T-antigenを導入すると緑色蛍光は消失したが、不死化自体には成功した。不死化細胞を単一クローンに分離して、クローン化を行い、複数のKiss1-GFPマウス由来の不死化細胞株を得ることに成功した。CRISPR/Casシステムを所属研究室にて確立し、視床下部不死化細胞においてCRISPRを使ってKiss1遺伝子プロモーター付近にエピジェネィック修飾タンパク質p300を強制発現させると、Kiss1発現が上昇した。よって、キスペプチンの発現制御には少なくともエピジェネティック修飾タンパクp300が関連することが示唆された。

我们对下丘脑样本中增强子特异性组蛋白修饰进行了染色质免疫沉淀分析，并将其映射到 UCSC 基因组浏览器。结果显示，小鼠基因组中大约有 1,000 至 2,400 个区域富含增强子特异性组蛋白修饰。另一方面，这些区域不包含 Kiss1 基因座。对 ARC 10 kb Kiss1 基因增强子候选区域的详细检查显示，ARC 样本中有一个区域经历了增强子特异性组蛋白修饰，但 AVPV 样本中未发生修饰。然而，映射信号的绝对数量很少，因此很难确定它们是否是真实信号。其原因被认为是样本中含有除 Kisspeptin 神经元以外的许多细胞。因此，我们尝试原代培养 Kiss1-GFP 小鼠的胚胎下丘脑，该小鼠在 Kisspeptin 神经元中表达绿色荧光蛋白，并使用 SV40T 抗原将其永生化。一旦传代，当引入SV40T抗原时，绿色荧光消失，但永生化本身是成功的。通过将永生化细胞分离成单个克隆并进行克隆，我们成功获得了来自 Kiss1-GFP 小鼠的多个永生化细胞系。我们实验室建立了CRISPR/Cas系统，当我们利用CRISPR在永生化下丘脑细胞中在Kiss1基因启动子附近强行表达表观遗传修饰蛋白p300时，Kiss1表达量增加。因此，推测至少表观遗传修饰蛋白p300参与了Kisspeptin表达的调控。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Identification of hypothalamic arcuate nucleus-specific enhancer region of kiss1 gene in mice.

小鼠下丘脑弓状核kiss1基因特异性增强子区的鉴定。

DOI：
10.1210/me.2014-1289
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Goto; T.; Tomikawa; J.; Ikegami; K.; Minabe; S.; Abe; H.; Fukanuma; T.; Imamura; T.; Takase; K.; Sanbo; M.; Tomita; K.; Hirabayashi; M.; Maeda; K.; Tsukamura; H.; Uenoyama; Y.
通讯作者：
Y.

Hypomorphic phenotype of Foxn1 gene-modified rats by CRISPR/Cas9 system.

通过 CRISPR/Cas9 系统研究 Foxn1 基因修饰大鼠的亚形表型。

DOI：
10.1007/s11248-016-9941-9
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
3
作者：
Goto T; Hara H; Nakauchi H; Hochi S; Hirabayashi M.
通讯作者：
Hirabayashi M.

Molecular and Epigenetic Mechanism Regulating Hypothalamic Kiss1 Gene Expression in Mammals.

调节哺乳动物下丘脑 Kiss1 基因表达的分子和表观遗传机制。

DOI：
10.1159/000445207
发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
4.1
作者：
Uenoyama Y; Tomikawa J; Inoue N; Goto T; Minabe S; Ieda N; Nakamura S; Watanabe Y; Ikegami K; Matsuda F; Ohkura S; Maeda KI; Tsukamura H.
通讯作者：
Tsukamura H.

Hypothalamic arcuate nuleus-specific enhancer for kisspeptin expression of female mice

雌性小鼠下丘脑弓形核特异性增强子 Kisspeptin 表达

DOI：
发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
0
作者：
Goto T; Tsukamura H; Tomikawa J; Abe H; Fukanuma T; Imamura T; Takase K; Sanbo M; Tomita K; Hirabayashi M; Maeda KI; Uenoyama Y.
通讯作者：
Uenoyama Y.

キスペプチンノックアウトマウス由来の卵子および精子の受精能の検討

Kisspeptin 敲除小鼠卵子和精子的受精潜力检查