サケ科魚類の卵黄形成機構に関与するリポ蛋白質受容体および関連蛋白の性状解析

鲑鱼卵黄发生机制中脂蛋白受体和相关蛋白的表征

• 批准号: 14J02064
• 负责人: 莚平 裕次
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-25 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14J02064/
• 关键词: 卵黄形成; ビテロジェニン; リポ蛋白質受容体; エンドサイトーシス; 卵黄球

近年の水産業は、過度の漁獲による天然の資源量の減少や枯渇が問題になっている。そのため、種苗放流による資源量の回復や天然資源に頼らない完全養殖技術の確立が求められている。しかし、飼育下で人為的に成熟を促すこと（人為催熟）が難しい、あるいは人為催熟に成功したとしても孵化率・初期生残率（卵質）が悪いことなどが、種苗生産現場での問題点であり、改善が望まれている。卵質を左右する要因の一つとして、胚発生や稚仔魚の栄養源となる卵黄が挙げられる。卵黄蛋白質は主にビテロジェニン（Vtg）と呼ばれる前駆物質に由来する。Vtgは肝臓で合成され、受容体を介したエンドサイトーシスによって卵母細胞内に取り込まれる。Vtgは複数のサブタイプが存在することが知られており、それらサブタイプの取り込みは複数のリポ蛋白質受容体によって調節されていると考えられる。本研究ではサケ科魚類のカットスロートトラウトを用いて卵黄形成に関与するリポ蛋白質受容体や受容体と共同で働く関連因子を同定することを目的としている。平成27年度は以下の成果を得た。今年度は昨年度に同定した新規リポ蛋白質受容体のLrp13について、哺乳類細胞を用いた機能解析を行った。その結果、Lrp13単独での発現では機能性は確認できなかった。このことから、哺乳類細胞で発現したLrp13には取り込みに関与する受容体の関連蛋白が発現していないことが考えられた。また、卵黄形成への関与が示唆されたリポ蛋白質受容体関連蛋白であるArhIIについて大腸菌発現系を用いた組換え蛋白質の作製を行った。特異抗体の作製によってLrp13とArhIIの検出が可能になったことから、Lrp13とArhIIを哺乳類細胞で共発現させた際の機能解析の評価が可能となった。

近年来，渔业面临着过度捕捞导致自然资源减少和枯竭的问题。因此，需要通过放苗来恢复种群，建立不依赖自然资源的完整水产养殖技术。然而，在种子生产现场，很难人工促进圈养成熟（人工催熟），或者即使人工催熟成功，孵化率和初始成活率（卵质量）也较差，这是一个问题，需要改进。想要的。影响鸡蛋质量的因素之一是蛋黄，它是胚胎发育和幼鱼的营养来源。蛋黄蛋白主要源自称为卵黄蛋白原 (Vtg) 的前体。 Vtg 在肝脏中合成并通过受体介导的内吞作用被摄取到卵母细胞中。已知Vtg有多种亚型，并且这些亚型的摄取被认为受到多种脂蛋白受体的调节。本研究的目的是利用鳟鱼（一种鲑科鱼）来鉴定参与卵黄发生的脂蛋白受体以及与受体共同作用的相关因子。 2015财年，我们取得了以下成果。今年，我们利用哺乳动物细胞对 Lrp13（去年发现的一种新型脂蛋白受体）进行了功能分析。结果，当Lrp13单独表达时，无法确认功能性。这表明哺乳动物细胞中表达的 Lrp13 不表达与参与摄取的受体相关的蛋白质。我们还使用大肠杆菌表达系统生产了 ArhII 重组蛋白，ArhII 是一种脂蛋白受体相关蛋白，已被认为参与卵黄发生。由于可以通过产生特异性抗体来检测Lrp13和ArhII，因此可以评估当Lrp13和ArhII在哺乳动物细胞中共表达时的功能分析。

项目成果

Detection and identification of plasma apolipoproteins using liquid chromatography-tandem mass spectrometry in cutthroat trout, Oncorhynchus clarki.

使用液相色谱-串联质谱法检测和鉴定切喉鳟鱼血浆载脂蛋白。

• 发表时间: 2014
• 作者: Mushirobira; Y.; Todo; T.; Hara; A;Hiramatsu N.
• 通讯作者: Hiramatsu N.

エゾメバルの卵巣発達に伴う3型ビテロジェニン遺伝子発現量の変化

石斑鱼卵巢发育相关的3型卵黄蛋白原基因表达水平的变化

• 发表时间: 2015
• 作者: 和田怜;西宮攻;横野孝典;莚平裕次;東藤孝;川崎琢真;松原孝博;澤口小有美;原彰彦;平松尚志
• 通讯作者: 平松尚志

カットスロートトラウト（Oncorhynchus clarki）における2型ビテロジェニンプロモーターの性状解析

鲤鱼 (Oncorhynchus clarki) 2 型卵黄蛋白原启动子的表征

• 发表时间: 2016
• 作者: 莚平裕次;西宮攻;永田淳;東藤孝;原彰彦;平松尚志
• 通讯作者: 平松尚志

Ligand binding properties of ovarian lipoprotein receptors in the cutthroat trout

鳟鱼卵巢脂蛋白受体的配体结合特性

• 发表时间: 2014
• 作者: Mushirobira; Y.; Mizuta; H.; Luo; W.; Todo; T.; Hara; A.; Reading B.J.; Sullivan; C.V.;Hiramatsu N.
• 通讯作者: Hiramatsu N.

Molecular cloning and partial characterization of a low-density lipoprotein receptor-related protein 13 (LRP13) involved in vitellogenin uptake in the cutthroat trout (Oncorhynchus clarki).

参与切喉鳟（Oncorhynchus clarki）卵黄蛋白原摄取的低密度脂蛋白受体相关蛋白 13 (LRP13) 的分子克隆和部分表征。

• DOI: 10.1002/mrd.22579
• 发表时间: 2015
• 作者: Mushirobira; Y.; Mizuta; H.; Luo; W.; Todo; T.; Hara; A.; Reading; B.J.; Sullivan; C.V.; Hiramatsu; N.
• 通讯作者: N.