蚊特異的フラビウイルスを利用した病原性フラビウイルスにおける宿主特異性機構の解明

利用蚊子特异性黄病毒阐明致病性黄病毒的宿主特异性机制

• 批准号: 22KJ0133
• 负责人: 小林 広子
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0133/
• 关键词: 昆虫特異的ウイルス; 宿主特異性; フラビウイルス; 温度適応性; ウイルス進化

蚊媒介性フラビウイルスは、日本脳炎ウイルス（JEV）やデングウイルス（DENV）等の脊椎動物にも感染性を有する病原性フラビウイルスと、蚊のみで感染が成立するとされている蚊特異的フラビウイルスに分類される。蚊特異的フラビウイルスと病原性フラビウイルスは遺伝的には近縁であるが、宿主特異性の違いに関わる機構は、ほとんど明らかとなっていない。本研究課題「蚊特異的フラビウイルスを利用した病原性フラビウイルスにおける宿主特異性機構の解明」では、脊椎動物に感染が成立する日本脳炎ウイルス（JEV）と、蚊特異的フラビウイルスであるバルケジライクウイルス（BJLV）の相同領域組換えウイルスを作出し、その性状を野生型ウイルスと比較解析することで、フラビウイルスの宿主特異性に寄与するウイルス因子を探索する。2022年度は、構造タンパク質prM、およびEの相同領域を置換したキメラウイルスの作成に成功し、キメラウイルスの宿主特異性を評価した。その結果、BJLVの構造タンパク質prMEは、哺乳類細胞において、蚊由来培養細胞と同様に培養温度依存的に侵入過程において機能することが明らかになった。細胞培養温度がウイルスの動態に影響することが判明した為、複数の蚊特異的フラビウイルスを対象に、蚊由来培養細胞を用いて、哺乳類動物細胞の培養温度条件で増殖できる温度順化ウイルス株の取得を開始した。また、BJLVの非構造タンパク質や非翻訳領域に関して、哺乳類細胞における複製への影響を調べるために、それらの領域の組換えウイルスの作出を試みたが、CPER法でのキメラウイルスの作成は困難であった。そこで、JEVとBJLVに関して、構造タンパク質領域をルシフェラーゼ遺伝子に置換したレプリコンアッセイの構築を開始し、構造タンパク質以外の領域に関して宿主特異性を検証する。

蚊子传播的黄病毒被分类为致病的黄病毒，这些黄病毒也对诸如日本脑炎病毒（JEV）和登革热病毒（DENV）和蚊子特异性黄素病毒等脊椎动物具有感染性，据说单独被蚊子感染。蚊子特异性的黄病毒和致病性黄病毒在遗传上密切相关，但是宿主特异性差异涉及的机制在很大程度上不清楚。 In this research topic, "Understanding the host specificity mechanism of pathogenic flaviviruses using mosquito-specific flaviviruses," we will create homologous recombinant viruses of Japanese encephalitis virus (JEV), which infects vertebrates, and Balkezilyk virus (BJLV), a mosquito-specific flavivirus, and compare their properties with wild-type viruses to search for有助于黄病毒的宿主特异性的病毒因素。在2022年，我们成功地创建了嵌合病毒，该病毒取代了结构蛋白PRM和E的同源区域，并评估了嵌合病毒的宿主特异性。结果，揭示了BJLV的结构蛋白PRME以培养温度依赖性的方式在哺乳动物细胞中起作用，类似于培养的蚊子细胞。由于发现细胞培养温度会影响病毒的动力学，因此我们开始使用蚊子衍生的培养细胞获得温度范围的病毒菌株，该病毒菌株可以在哺乳动物动物细胞的培养温度条件下生长。此外，为了研究非结构蛋白和BJLV的非翻译区域对哺乳动物细胞复制的影响，我们试图在这些区域生成重组病毒，但是很难使用CPER方法创建嵌合病毒。因此，对于JEV和BJLV，我们开始构建一种复制子测定法，其中结构蛋白区域被荧光素酶基因代替，并验证除结构蛋白以外的区域的宿主特异性。

项目成果

蚊媒介性フラビウイルスにおける脊椎動物感染性に寄与する因子の探索

寻找导致蚊媒黄病毒脊椎动物传染性的因素

• 发表时间: 2022
• 作者: 小林広子;田畑耕史郎;佐々木道仁;澤洋文;大場靖子
• 通讯作者: 大場靖子

脊椎動物感染フラビウイルスと蚊特異的フラビウイルスの比較解析によるフラビウイルス種特異性決定機構の探索

通过脊椎动物感染黄病毒和蚊子特异性黄病毒的比较分析，探讨决定黄病毒种特异性的机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 小林広子;田畑耕史郎;佐々木道仁;澤洋文;大場靖子
• 通讯作者: 大場靖子

蚊特異的フラビウイルスを用いた組み換えフラビウイルスの作出と種特異的増殖機構の解明

使用蚊子特异性黄病毒创建重组黄病毒并阐明物种特异性生长机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 小林広子;田畑耕史郎;佐々木道仁;澤洋文;大場靖子
• 通讯作者: 大場靖子