Mer受容体に対するリガンドとしての新規プロテインSファミリー蛋白質の同定

鉴定新型蛋白质 S 家族蛋白质作为 Mer 受体的配体

基本信息

批准号：
08680657
负责人：
水野健作
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680657/
关键词：
受容体型チロシンキナーゼプロテインS Gas6 細胞増殖因子 Mer Sky Axl

项目摘要

受容体型チロシンキナーゼは細胞増殖因子・分化因子などの受容体として細胞外シグナルを細胞内に伝達する重要な機能を果たしている。私たちは新規な受容体型チロシンキナーゼSkyを同定し、さらにそのリガンドが抗血液凝固因子プロテインSに類似した蛋白質Gas6であることを明らかにした。本研究ではSky受容体ファミリーに属するMerのリガンドとして新規な増殖因子を同定、クローニングし、その生理活性を解明することを目的として、以下の実験を行った。1、Gas6とプロテインS、および3種の受容体Axl,Sky,Merの結合を、可溶型受容体をもちいた結合実験や受容体発現細胞を用いた受容体の自己リン酸化を指標として調べ、いずれの受容体もGas6を結合するが、プロテインSは結合しないことを見いだした。また、Gas6と受容体の結合の強さをBiacoreを用いて測定し、Axl>Sky>Merの順に親和性が高いことを明らかにした。Gas6とMerの解離定数は約30nMで、おそらくより親和性の高い新規なリガンド分子が存在すると考えられた。2、Gas6とプロテインSの構造に基づいて、low stringency条件下でのcDNAスクリーニングを行ったが、EGFドメインを持つ数種の蛋白質をコードするcDNA以外には新規なプロテインSファミリー分子をクローニングすることはできなかった。そこでGas6分子中の受容体結合ドメインを特定することにした。種々の欠失変異体を作成し、受容体結合能を調べた結果,C末端部の性ホルモン結合グロブリン様ドメインが結合に必要、十分であることを明らかにした。現在、この領域をプローブとして再度スクリーニングを行っているところである。

受体型酪氨酸激酶用作受体，例如细胞生长因子和分化因子，以将细胞外信号传播到细胞中。我们确定了一种新型的受体酪氨酸激酶天空，并进一步揭示了其配体是GAS6，一种类似于抗凝集蛋白的蛋白。在这项研究中，进行了以下实验，目的是识别和克隆新的生长因子作为MER的配体，属于天空受体家族，并阐明了其生理学活性。 1。我们使用与可溶受体的结合实验研究了GAS6与蛋白质S与蛋白质的结合，使用受体表达受体的细胞作为指标，并发现了两种受体的结合，并且发现bos 6与受体之间的结合较高，并发现by6的结合强度，并发现两个受体的强度Axl> Sky> MER。 GAS6和MER的解离常数约为30 nm，人们认为有一个新型的配体分子具有较高的亲和力。 2。根据GAS6和蛋白质的结构，在低严格条件下进行cDNA筛选，但是除了编码具有EGF结构域的几种蛋白质外，不能克隆新的蛋白质家族分子。因此，我们决定鉴定GAS6分子中的受体结合结构域。创建了各种缺失突变体，并检查了受体结合能力，并发现在C末端的性激素结合球蛋白样结构域是必需的，足以结合。目前，该区域正在再次作为探针进行筛选。