タイトジャンクション可逆的開口剤の作用機構の解明と薬剤吸収促進剤への応用

紧密连接可逆开放剂作用机制的阐明及其在药物吸收促进剂中的应用

• 批准号: 22KJ0349
• 负责人: 向山 海凪
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0349/
• 关键词: タイトジャンクション; MA026; 経皮吸収促進剤; Claudin; クローディン; 環状ペプチド; Claudin-1

シュードモナス由来の天然環状ペプチドMA026はイヌ腎臓上皮細胞MDCK IIで上皮細胞間接着構造であるタイトジャンクションを開口する活性を示すことが報告されており、経皮吸収促進剤の候補として注目されている。以前の研究より、MA026はタイトジャンクションの重要な構成タンパク質であるClaudin-1のVFDSLL領域へ結合することが示唆されているが、結合様式の詳細や結合後にタイトジャンクション開口を引き起こすメカニズムは不明のままである。本研究ではMA026のタイトジャンクション開口メカニズムの詳細な分子機構の解析を目的とする。MDCK IIで発現している5種類のClaudinを全てノックアウト(KO)したタイトジャンクション構造を持たないqKO細胞株に各ClaudinファミリーまたはVFDSLL領域に変異を入れたClaudin-1を発現させた株を取得し、それらの細胞株に対して物質透過性実験を行うことでMA026とClaudinの相互作用を明らかにすることを目指す。今回、qKO細胞へ発現させるClaudinへ付加するタグを検討したところ、N末端側にMycタグを付加したClaudin-1が十分なタイトジャンクション形成能を示し、解析に適していることが明らかとなった。さらに今回取得したN末端Myc-Claudin-1発現細胞株では、MA026処理によるタイトジャンクション開口活性も確認できた。また、N末端にMycタグを付加した他のClaudinファミリーの発現プラスミドの構築を複数完了した。

据报道，源自假单胞菌的天然循环肽MA026表现出可吸引紧密连接的活性，犬肾上皮细胞MDCK II中的上皮细胞之间的上皮细胞粘附结构，并吸引了作为传播吸收增强剂的候选者的注意。先前的研究表明，MA026与Claudin-1的VFDSLL区域结合，Claudin-1是紧密连接的关键组成蛋白，但结合模式和结合后引起紧密连接开口的机制的细节尚不清楚。这项研究旨在分析MA026紧密连接开口机理的详细分子机制。我们的目的是在QKO细胞系中每个Claudin家族或VFDSLL区域中具有突变表达Claudin-1的菌株，该菌株没有紧密的连接结构，该结构不敲除MDCK II中表达的所有五种claudin，并在这些细胞系上执行MA026和Claudin之间的相互作用的物质通透性实验。当我们研究要在QKO细胞中添加到claudin中的标签时，据透露，在N末端附着MYC标签的Claudin-1具有足够的紧密连接形成能力，并且适合分析。此外，这次获得的N末端MYC-Claudin-1表达细胞系也证实了由MA026治疗引起的紧密打开活动。此外，添加到N末端的其他Claudin家族的表达质粒的多次构造完成了。

项目成果

TJ開口剤MA026のClaudinファミリーに対する標的特異性の検討

检查 TJ 开启剂 MA026 针对 Claudin 家族的靶点特异性

• 发表时间: 2022
• 作者: 向山海凪;内山千尋;福田茜;倉持由佳;今野翔;谷口敦彦;南雲陽子;林良雄;臼井健郎
• 通讯作者: 臼井健郎

注射・点滴不要のバイオ医薬品投与法の開発

开发不需要注射或滴注的生物药物给药方法

• 发表时间: 2021
• 期刊: 化学工業
• 作者: 向山海凪;南雲陽子;臼井健郎
• 通讯作者: 臼井健郎

環状ペプチドMA026の結晶構造解析およびTJ開口メカニズムに関する研究

环肽MA026晶体结构分析及TJ开放机制研究

• 发表时间: 2022
• 作者: 向山海凪;松垣直宏;大石智一;南雲陽子;川田学;林良雄;千田俊哉;臼井健郎
• 通讯作者: 臼井健郎

環状ペプチドMA026のTJ開口活性の作用機構解析

环肽MA026的TJ开放活性机制分析

• 发表时间: 2021
• 作者: 向山海凪;内山千尋;福田茜;倉持由佳;松垣直宏;千田俊哉;谷口敦彦;今野翔;林良雄;南雲陽子;臼井健郎
• 通讯作者: 臼井健郎