部位特異的突然変異誘発による胎盤性ラクトジェンの糖鎖機能解析

通过定点诱变分析胎盘催乳素的聚糖功能

• 批准号: 08760272
• 负责人: 服部 中
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760272/
• 关键词: 胎盤; 胎盤性ラクトジェン; 糖タンパク質; アスパラギン結合型糖鎖; site-directed mutagenesis; プロラクチン受容体; Nb2 lymphoma cell; JAK2

多機能胎盤性因子である胎盤性ラクトジェン(PL)は大部分が糖タンパク質であることが知られており、PLの分子多様性と機能発現という観点からもその糖鎖構造や機能の解明が待たれている。本研究ではPL-Im糖鎖の有する機能を探ることを目的として、部位特異的突然変異誘発(site-derected mutagenesis)によってPL-Im遺伝子のアスパラギン結合型糖鎖(N型糖鎖)の付加部位を改変し、N型糖鎖の一部あるいは全部を持たない遺伝子組換えPL-Imを作成することで、それらの分子の生物活性や分子物性を測定した。無変異組換えPL-Im(wild type)に比べてN型糖鎖結合部位を1ヶ所(N79Q、N128Q)あるいは2ヶ所(N79/128Q)改変したものでは、いずれも分子量が減少し、PL-ImのN型糖鎖結合可能部位にはいずれにもN型糖鎖が結合していることが明らかになった。PL分子の生物活性の指標となるNb2細胞を用いた増殖試験では、wild typeに対してN79Q、N128Q、N79-128Qの活性はそれぞれ59%、48%、41%に減少しており、PL-Im分子ではN型糖鎖が生物活性に重要な働き有することが明らかになった。ところが、これらの組換え分子のプロラクチン(PRL)受容体への結合活性は糖鎖の有無にかかわらず変化がなかった。また、PRL受容体のシグナル伝達にかかわっているJAK2分子のリン酸化能についても、各組換え体間での差は認められなかった。これらの結果から、PL-Im分子は従来考えられていたPRL受容体を介したシグナル伝達機構以外の異なる経路も利用してその機能を発現していることが考えられた。さらにこの経路には糖鎖が重要な働きを持つと考えられる。今後この経路を詳しく解析することは、PL-Im糖鎖の機能のみならずPLの新しい機能解明にも貢献するものと期待される。

已知胎盘泌乳（PL）是一种多功能胎盘因子，主要是糖蛋白，并且从分子多样性和PL的功能表达的角度来看，其聚糖的结构和功能也在等待。在这项研究中，为了探索PL-IM糖链的功能，通过定位定向诱变，可以修改PL-IM基因的天冬酰胺连接的聚糖（N型糖链）的添加位点，以创建一个不包含N-TYPE糖链和分子分析的所有或所有n型糖链的遗传修饰的PL-IM，这些PL-im不包含任何或所有的n型糖链。与未直流的重组PL-IM（野生型）1或2位点（N79Q，N128Q）修饰的N型Glycan结合位点在两个地点均降低，并且发现N型Glycans绑定到每个位点与每个N型Glycans绑定到每个位点，可以与PL-IM的每个位点结合。在使用NB2细胞的增殖测试中，这是PL分子的生物活性的指标，N79Q，N128Q和N79-128Q的活性分别降低至59％，48％，48％和41％的野生型，表明N型Glycans在PL-im Metrecules中起着重要的作用在PL-im Metrecules中起重要作用。然而，这些重组分子与催乳素（PRL）受体的结合活性都没有变化，无论存在或不存在聚糖。此外，在重组之间参与PRL受体信号的JAK2分子的磷酸化能力中没有观察到差异。这些结果表明，PL-IM分子还利用了除常规构想的信号转导机制以外的其他途径来表达其功能。此外，人们认为糖链在这一途径中具有重要作用。预计将来，对该途径的详细分析不仅会促进PL-IM糖链的功能，而且还将阐明PL的新功能。

项目成果

Imai,A.他: "Detection of novel molecules recongnized by anti-placental lactogen antibody in rat amniotic fluid" Endocrine Journal. 44(2). (1997)

Imai, A. 等人：“大鼠羊水中抗胎盘催乳素抗体识别的新分子的检测”内分泌杂志 44(2) (1997)。