細胞内酸化的損傷のモニタリングシステムを用いた新規抗酸化成分の究明

利用细胞内氧化损伤监测系统研究新型抗氧化成分

基本信息

批准号：
08760118
负责人：
村上明
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kinki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760118/
关键词：
superoxide hydroperoxide HL-60 cells flow cytometer chemoprevention oxidative stress anti-tumor promoter leukocyte

项目摘要

脂肪酸、あるいはそのエステルなどを用いた従来の抗酸化試験は、溶媒、温度、脂肪酸の種類によって抗酸化活性の評価に再現性や統一性が認められない例も多い。そこで本研究では、細胞内hydroperoxide(ROOH)の産生に対する抑制活性をモニターすることにより、新規抗酸化成分の究明を試みた。HL-60細胞をDMSOにより顆粒球様細胞へと分化させ、発癌プロモーターである12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA)によって生成するROOHを蛍光標識し、flow cytometerで解析した。スクリーニングによって抑制活性の認められた野菜類から抗酸化物質を検索したところ、1'-acetoxychavicol acetate(ACA)(Languas galanga、和名:ナンキョウ)、pheophorbite a(Neptunia oleracea、和名:ミズオジギソウ)、AL-1とAL-2(Artemisia latiflora、和名:ヨモギナ)、およびauraptene(Citrus natsudaidai、和名:ナツミカン)が単離できた。以上の化合物は、細胞内NADPH oxidase系の抑制によりsuperoxide産生量を減少させ、その結果ROOH量が低下したものと推察された。これら全ての物質にマウス皮膚癌プロモーション抑制活性が認められたが、さらにACAとaurapteneは、経口投与でも、ラット口腔および大腸発癌を著名に抑制した。以上の研究結果は、細胞内酸化的損傷のモニタリングシステムを用いた評価法が、新規抗酸化物質や発癌抑制物質の究明に極めて有用であることを示すものである。

在使用脂肪酸或其酯的传统抗氧化测试中，根据溶剂、温度和脂肪酸类型的不同，抗氧化活性的评价在许多情况下无法再现或一致。在这项研究中，我们试图通过监测新的抗氧化成分对细胞内氢过氧化物（ROOH）产生的抑制活性来鉴定它们。使用 DMSO 将 HL-60 细胞分化为粒细胞样细胞，并对由致癌启动子 12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯 (TPA) 产生的 ROOH 进行荧光标记并使用流式细胞仪进行分析。当我们从蔬菜中筛选出具有抑制活性的抗氧化剂时，我们发现了1'-乙酰氧基查维酚乙酸酯（ACA）（Languas galanga，日文名：Ananthus）、脱镁叶绿酸a（Neptunia oleracea，日文名：西瓜）、 AL-1 和 AL-2（Artemisia latiflora，日本名：Artemisia latiflora）和 auraptene（柑橘） Natsudaidai（日文名：Natsumikan）被成功分离。推测上述化合物通过抑制细胞内的NADPH氧化酶系统而减少了产生的超氧化物的量，结果，ROOH的量减少。所有这些物质都被发现具有抑制小鼠皮肤癌促进的活性，ACA和aurapten在口服给药时还显着抑制大鼠口腔和结肠癌的发生。上述研究结果表明，利用细胞内氧化损伤监测系统的评估方法对于研究新型抗氧化剂和致癌抑制剂非常有用。