動物腸管内における乳酸菌の定着能判定法と定着メカニズム解析法の構築

动物肠道内乳酸菌定植能力测定方法及定植机制分析方法的建立

• 批准号: 09876069
• 负责人: 伊藤 敞敏
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09876069/
• 关键词: 乳酸菌; アシドフィルス; ムチン; 表層タンパク質; プロバイオティクス; Lactobacillus amylovorus; Lactobacillus johnsonii

アシドフィルスグループ乳酸菌は、ヒトを初めとして各種動物の腸管内に見出される頻度の高い乳酸菌であり、プロバイオティクスとして利用できる主要な菌種である。これらが腸管壁に付着する能力を判定する手法を確立するため、前年度の研究に続いて、ヒトの腸管ムチンに類似した糖鎖構造を持つラットムチンを用い、これをマイクロプレート上にコーティングしておき、これによりアシドフイルスグループ乳酸菌の表層タンパク質の付着性を測定する方法を検討した。即ち、ヒトをはじめ各種の動物の腸管から分離されたアシドフィルスグループ乳酸菌、6菌種35菌株の菌体より6M塩酸グアニジン抽出によって表層タンパク質(SLP)を抽出し、これをマイクロプレート上にコーティングしたラットムチンと反応させ、結合量を測定することによって、付着性を判定した。その結果、ヒト腸管より分離されたL.gasseri、L.johnsoniiに付着性の高いものが多く分布していることが認められた。このような原理に基づき、各種動物の腸管ムチンを取り、これをマイクロプレート上に固定化しておき、それら動物腸管由来の乳酸菌のSLPと反応させることにより、付着性の高い菌株を選別することができ、プロバイオティックとしての菌株の選出法として利用できるものと考えられた。次に、SLP成分の中から付着に関与している成分を調べるために、ラットムチンに付着した成分をpH2.5のギ酸Bufferで抽出して回収し、電気泳動法によって調べた。その結果、付着に関与する特定の成分の存在することが認められ、これらを解析することによって付着性の機構を知ることもできるものと考えられた。

嗜酸菌群乳酸菌常见于包括人类在内的各种动物的肠道中，是可用作益生菌的主要菌种。为了建立测定它们粘附肠壁能力的方法，继前一年的研究之后，我们使用具有与人肠道粘蛋白类似的糖链结构的大鼠粘蛋白，并将其包被在微孔板上我们研究了一种测量嗜酸菌群乳酸菌表面蛋白粘附的方法。具体而言，通过6M盐酸胍提取从包括人在内的各种动物的肠道中分离的6种嗜酸乳杆菌群的35株细胞中提取表面层蛋白(SLP)，并将大鼠粘蛋白包被在微孔板上。通过与结合反应并测量结合量来确定。结果发现，从人体肠道分离的L.gasseri和L.johnsonii具有高度粘附性。基于该原理，通过从各种动物中获取肠粘蛋白，将其固定在微孔板上，并使其与来自动物肠道的乳酸菌的SLP反应，可以选择高粘附性的细菌菌株。可用作选择用作益生菌的菌株的方法。接下来，为了研究参与SLP成分间粘附的成分，用pH 2.5的甲酸缓冲液提取并回收附着于大鼠粘蛋白的成分，并通过电泳进行检查。结果，认识到存在与粘附相关的特定成分，并且认为通过分析这些成分，可以了解粘附的机制。