内向き整流K^+チャネル遺伝子導入による頻拍性不整脈治療(成熟動物心筋細胞を用いた基礎研究)

通过内向整流K^+通道基因转移治疗快速心律失常（使用成年动物心肌细胞的基础研究）

基本信息

批准号：
09877011
负责人：
清末達人
金额：
$ 1.22万
依托单位：
大分医科大学
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、頻拍性不整脈における新たな治療法を開発することをめざし、心筋細胞に外来のK^+チャネル遺伝子を導入する試みを行ってきた。これまでにアフリカツメガエル卵母細胞や、哺乳動物培養細胞株(CHO細胞、COS細胞)へIRK1チャネル遺伝子を導入し、単一チャネル電流および全細胞電流を記録して、単一チャネルコンダクタンスや、平均開時間、閉時間、Ba^<2+>感受性などを調べ、IRK1チャネルの発現を確認した。本年度は、成熟心筋細胞への遺伝子導入への第一歩として、ラットの異所心移植モデル(Ono-Lindseyモデル)を作成し、電気穿孔法による遺伝子ベクター導入の試みを行った。このモデルは、ドナー心の大動脈と肺動脈をレシピエントの下大動脈と下大静脈に、それぞれ吻合させるものである。移植された心臓はレシピエントの血液循環を担う必要がないので、電気穿孔法を用いた遺伝子導入手技に伴う侵襲に十分耐えることができる。K^+チャネル遺伝子の導入に先だち、遺伝子発現のレポーター分子GFP(Green Fluorescent Protein)をコードするベクターの導入実験を行った。その結果、広範な心筋細胞が蛍光を発するようになり、電気穿孔法による遺伝子導入が可能であるという示唆が得られた。その後、実際にIRK1の遺伝子導入実験を続けているが、現段階では明らかなチャネル発現は確認されていない。今後とも引き続き、最適な手技の開発をめざして検討を進める予定である。

这项研究试图将外国K^+通道基因引入心肌细胞中，目的是为心律不齐而开发新的治疗方法。迄今为止，已经将IRK1通道基因引入了爪蟾卵母细胞和哺乳动物培养的细胞系（CHO细胞，COS细胞），并且已经记录了单渠道和全细胞电流，以检查单渠道电导，平均开放时间，闭合时间，ba^<2+>敏感性，并确认IRK1通道的表达。今年，作为转移到成熟心肌细胞的第一步，我们在大鼠（Ono-Lindsey模型）中创建了异位心脏移植模型，并试图使用电穿孔引入基因载体。该模型涉及分别将供体心脏的主动脉和肺动脉吻合到受体下主动脉和下腔静脉。植入的心脏不需要对接受者的血液循环负责，并且可以充分承受使用电穿孔与基因转移程序相关的侵袭。在引入K^+通道基因之前，进行了一个实验，以引入编码基因表达报告基因表达者GFP（绿色荧光蛋白）的载体。结果，多种心肌细胞开始发出荧光，表明可以通过电穿孔转移基因。从那时起，已经进行了IRK1基因转移实验，但是在此阶段尚未确认清晰的通道表达。我们计划继续进行研究，以开发最佳技术。