V-H-ras抑制変異体N116Yを用いた膵癌遺伝子治療に関する基礎的研究

V-H-ras抑制突变体N116Y胰腺癌基因治疗的基础研究

基本信息

批准号：
08877182
负责人：
高橋利幸
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877182/
关键词：
N116Y pancreatic cancer K-ras gene-therapy transformation CEA adenovirus vector H-ras carcinoma cells genetherapy mutations

项目摘要

昨年までの研究において,独自に樹立した10種のヒト膵癌培養細胞株PCI-6、10、19、24、35、43、55、64、66、68の全てにおいてK-rasコドン12、13の変異が認められることを確認した。さらに、これらras変異をもつ膵癌細胞に対してポフェクション法を用いてN116Yを実験的に遺伝子導入し、N116Yが膵癌細胞増殖抑制効果を示すことをin vitroにおいて証明し、各種学会、および学術誌において発表してきた。その後、本研究の実用化を目標として、癌細胞へのN116Y遺伝子導入効率の向上、副作用の軽減のためにアデノウイルスペクターを用いて研究を行った。すなわち、N116YとCMV(サイトメガロウイルス)プロモーターを上流に組み込んだアデノウイルスペクター(Ad CMV N116Y)を作成し、その遺伝子導入効率と膵癌細胞増殖抑制効果を検討した。その結果、膵癌細胞ではアデノウイルスペクターを用いてmoi200で65-90%の導入効率が得られ、またmoi200あるいは400においてコントロールに比して全ての膵癌細胞におけるin vitroでの増殖抑制効果が得られた。さらに、癌特異的な治療効果を高めるため、CEAプロモーターによる腫瘍特異的遺伝子発現システムを開発した。すなわちCEAプロモーターとN116Yを上流に組み込んだアデノウイルスペクター(Ad CEA N116Y)を作成し、これを用いてin vitroにおける各種膵癌細胞増殖抑制効果を検討したところ、CEA非産生の膵癌細胞株PCI-19、24に対してはAd CEA N116Yはmoi400でも増殖抑制を示さなかったのに対し、CEA産生膵癌細胞PCI-35、43、66の各株においてmoi200においてコントロールに比べ、有意の細胞増殖抑制効果を現した。以上よりアデノウイルスペクターとCEAプロモーターの利用によってN116YのCEA産生膵癌細胞に対する高い腫瘍特異的遺伝子治療効果が実証された。

直到去年直到去年的研究证实，在所有10个独立建立的人类胰腺癌细胞系中都观察到了12和13中的突变，PCI-6、10、19、24、35、43、55、55、64、66和68。抑制胰腺癌细胞生长的影响，并已发表在各种学术社会和期刊上。之后，为了实际应用这项研究，我们使用腺病毒病毒petor进行了研究，以提高N116Y基因转移到癌细胞中的效率并减少副作用。换句话说，创建了一个腺病毒钢铁（AD CMV N116Y），其中N116Y和CMV（巨细胞病毒）启动子在上游纳入了启动子，其基因转移效率及其对胰腺癌细胞生长的抑制作用。结果，在胰腺癌细胞中，MOI200用于获得MOI200的65-90％转导效率，并且与对照组相比，所有胰腺癌细胞的体外抑制作用，获得MOI200或400。此外，为了增强癌症特异性治疗效应，开发了使用CEA启动子的肿瘤特异性基因表达系统。换句话说，创建了一种腺病毒病毒（AD CEA N116Y），其中CEA启动子和N116Y上游掺入了N116Y，并研究了抑制各种胰腺癌细胞在体外的增殖的作用。相比之下，AD CEA N116Y对MOI400的增殖没有抑制，对无CEA胰腺癌细胞系PCI-19和24，而在MOI400中，CEA产生的胰腺癌细胞PCI-35、43和66，对MOI200的细胞扩散对对照组的细胞扩散有显着抑制。从以上，使用腺病毒Pector和CEA启动子显示出高肿瘤特异性基因疗法对N116Y的CEA产生胰腺癌细胞的影响。