神経幹細胞における選択的スプライシング制御の生理学的役割の解明

阐明神经干细胞中选择性剪接控制的生理作用

• 批准号: 12J06431
• 负责人: 柴嵜 孝幸
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 2013
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12J06431/
• 关键词: RNA結合蛋白質; 神経幹細胞; PTBP1; 脳発生

今年度は、当初の計画を変更して作製に取り組んでいたPTB/nPTB二重欠損マウス(Ptbfl/fl ; Nestin-CreERT2マウス)の解析を行った。具体的には、生後8週齢の成体Ptbfl/fl ; Nestin-CreERT2マウスに対して、経口投与によりタモキシフェンを導入し、コンディショナルにPTB/nPTBを欠損させ、投与後5週までの期間において、神経幹細胞の生存、分化、増殖に着目し、組織学的な解析を行った。申請した研究計画では、PTB遺伝子の欠損により成体神経幹細胞に見られる異常を端緒して、選択的スプライシング制御の役割に迫る予定であった。しかしながら、成体神経幹細胞では、胎生期神経幹細胞と異なり、PTB遺伝子単独の欠損では顕著な異常がみられなかった。一方で、胎生期神経幹細胞では、PTBとその相同遺伝子nPTBの二重欠損により、表現型が激しくなることを見いだした。このことから、成体神経幹細胞ではPTBの働きはその相同遺伝子であるnPTBにより補償されるのでないかと考え、計画を変更しPTB/nPTB二重欠損を誘導できるPtbfl/fl ; Nestin-CreERT2マウスの作製に取り組んだ。研究期間内に作製が間に合ったため、解析を開始した。予備的な実験結果では、PTB/nPTBの二重欠損を誘導したマウスの海馬では幹細胞マーカーであるNestin陽性細胞が減少するという結果が得られており、さらに詳細な解析を行っていく予定である。

今年，我们改变了原来的计划，分析了PTB/nPTB双缺陷小鼠（Ptbfl/fl；Nestin-CreERT2小鼠）。具体而言，对8周龄的成年Nestin-CreERT2小鼠口服给予他莫昔芬以条件性缺乏PTB/nPTB，并在给药后长达5周的时间里进行组织学分析，重点关注存活、分化和增殖。神经干细胞。拟议的研究计划是探索选择性剪接调节的作用，首先从在成体神经干细胞中观察到的由于 PTB 基因缺失而观察到的异常开始。然而，与胚胎神经干细胞不同，单独删除PTB基因并不会导致成体神经干细胞出现明显异常。另一方面，在胚胎神经干细胞中，我们发现PTB及其同源物nPTB的双重缺失导致了严重的表型。基于此，我们推测成体神经干细胞中PTB的功能可能是通过其同源基因nPTB来补偿的，并改变了我们的计划，创建了可诱导PTB/nPTB双重缺失的Ptbfl/fl；Nestin-CreERT2小鼠。我努力了。由于制造已在研究期内完成，因此分析已经开始。初步实验结果表明，PTB/nPTB双重缺陷的小鼠海马中干细胞标记物Nestin阳性的细胞数量减少，我们计划进行更详细的分析。

项目成果

PTB deficiency causes the loss of adherens junctions in the dorsal telencehalon and leads to lethal

PTB 缺乏会导致端脑背侧粘附连接丧失并导致致命

• DOI: 10.1093/cercor/bhs161
• 发表时间: 2013
• 影响因子: 3.7
• 作者: 柴嵜孝幸