Establishment of a method for differentiation characterization of stem cell clones using frozen sections and its application to stem cell sorting

冰冻切片干细胞克隆分化表征方法的建立及其在干细胞分选中的应用

• 批准号: 22K10206
• 负责人: 田所 晋
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tsurumi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10206/
• 关键词: 再生医療; 凍結切片上培養; 分化誘導; 幹細胞; 凍結切片; 細胞増殖因子; 細胞培養

現在行われている生体臓器移植や、人工臓器移植などの先端医療には、それぞれ拒絶反応や耐久性、機械的強度などの様々な問題点や限界がある。再生医療の実用化を目指す上で重要になるのが最適な細胞源の確保と分化誘導法の確立であるが、現在、細胞源の候補である胚性幹細胞、成体幹細胞、人工多能性幹細胞、いずれにおいても、どの臓器の再生を目指すときにどの細胞が最適であるかというところは不明のままである。また、分化誘導法としても、増殖・分化因子の組み合わせを添加し培養する方法が主流であり、添加因子の理想的組み合わせは未だに十分とは言い難く、決定は困難であるのが現状である。そこで本研究では、これまでに申請者らがiPS細胞の分化誘導と品質管理において報告してきた方法を応用し、再生を目指す目的臓器の凍結切片上で各種幹細胞の培養を行うことにより細胞分化を誘導し、その誘導効率の差からそれぞれの幹細胞の目的臓器の機能細胞への分化しやすさ(分化特性)を評価することにより、どのような状態の幹細胞が目的臓器・組織再生のための細胞源として最適かを簡便かつ安価に検証し、選別できる新たな評価法を確立することを目的に研究を進めた。本年度は、マウスの各種臓器・組織(脳、脊髄、肝臓、心臓、筋肉、唾液線、脂肪組織等)の凍結切片を作成し、これまでにわれわれが報告してきたiPS細胞の凍結切片上での培養法に準じて、それぞれの凍結切片上で、各種のヒト由来幹細胞(骨髄間葉系 幹細胞、歯髄幹細胞、脂肪組織由来幹細胞等:Lonza、RIKEN等から入手予定)を培養するが、まずは我々が多く取り扱っている歯髄幹細胞を対象に、すでに本法によりiPS細胞の分化誘導が可能なことが確認され、誘導効率の差による品質評価が可能であることが明らかとなっている脳、脊髄および肝臓を優先して文化誘導を試み、検証を続けている。

当前，诸如生命器官移植和人造器官移植之类的先进医疗保健都有各种问题和局限性，例如排斥，耐用性和机械强度。为了实际使用再生医学，确保最佳细胞来源并建立差异化的方法很重要，但是目前尚不清楚哪些细胞是所有潜在的胚胎干细胞，成人干细胞，成人干细胞和诱导多能干细胞的最佳细胞，这是细胞来源的靶标，在哪个细胞中仍然是哪个细胞的靶标，在哪些细胞中是重新培训的。此外，作为诱导分化的一种方法，主流方法是增加和培养增殖和分化因子的组合，而添加因子的理想组合仍然很难说，因此很难确定。因此，在这项研究中，我们应用了申请人在IPS细胞诱导IPS细胞诱导IPS细胞中报告的方法，以及通过在旨在再生的目标器官的冻结段中培养各种干细胞，我们进行了研究，我们进行了研究，以便建立一个易于验证的细胞和相关的细胞，以验证和协同的组织，以实现其范围，并实现了孔子的范围，并具有附加性的组织，并具有附加的组织类型，以实现验证和附加性的组织。再生。今年，我们已经准备了小鼠各种器官和组织的冷冻切片（脑，脊髓，肝脏，心脏，心脏，肌肉，肌肉，唾液，唾液线，脂肪组织等）和培养各种人类衍生的干细胞（骨髓间质细胞（骨髓间质干细胞），牙科浆干细胞，牙科干细胞，脂肪组织的干细胞，脂肪组织的细胞等等。截面，各种人类衍生的干细胞（计划从Lonza，Riken等获得），首先是使用该方法诱导IPS细胞分化的方法，并确认此方法可以诱导分化并基于诱导效率的差异来评估培养的质量。