インクレチンホルモンによるGLUT4小胞輸送促進作用における分子生物学的解析

肠促胰岛素激素促进GLUT4囊泡运输的分子生物学分析

基本信息

批准号：
22K10149
负责人：
長野公喜
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K10149/
关键词：
インクレチン GLUT4 インスリン

项目摘要

われわれは、脂肪細胞や筋細胞において、開口分泌調節タンパク質 tomosyn がインスリン依存性の糖取り込みを調節することを遺伝子組み換え技術を用いながら示してきた。一方、これらの細胞への糖取り込みはインクレチンホルモンの一つである GIP によって直接促進されることが近年明らかにされてきたが、詳細な分子機序については不明のままである。本研究では GIP による糖取り込み促進作用における tomosyn の関与を明らかにし、その分子メカニズムを解明する。これにより、糖尿病治療の新たな創薬ターゲットと成り得る候補分子の発見につながり、今後の糖尿病研究に影響を与えると考えられる。2022年度は GIP による tomosyn S760 のリン酸化の影響を調べた。脂肪細胞や筋管細胞内で GIP 刺激に対する tomosyn のリン酸化の有無を確認した。次に脂肪細胞に分化させた 3T3-L1 細胞あるいは筋管細胞に分化させた C2C12 細胞に FLAG タグを付加した tomosyn 野生体、S760をアラニンに置換しリン酸化できないように組み換えた変異体 (S760A) をそれぞれ遺伝子導入し、32Pラベルされた ATP を取り込ませ、GIP 刺激した後に抗 FLAG 抗体によって tomosyn を免疫沈降し、その放射活性をオートラジオクラフィーで比較、定量した。遺伝子導入方法は、これまでに実験実績のある、リポフェクションによって遺伝子を一過性に強制発現させる手法を用いた。

我们已经使用转基因技术证明了开放的分泌调节蛋白润肤菌调节脂肪细胞和心肌细胞中胰岛素依赖性糖的摄取。另一方面，最近已经发现，这些细胞中的糖摄取是由肠降直型蛋白激素之一GIP直接促进的，但是详细的分子机制仍然未知。这项研究揭示了Tomosyn参与GIP摄取葡萄糖的启动子，并阐明了其分子机制。这将导致发现候选分子，这可能是糖尿病治疗的新药物发现靶标，并会影响未来的糖尿病研究。在2022财年，我们通过GIP研究了Tomosyn S760磷酸化的作用。我们检查了在脂肪细胞和肌管细胞中是否观察到tomosyn磷酸化以进行GIP刺激。接下来，将添加到脂肪细胞中的C2C12细胞中添加到C2C12细胞中的野生野生体，然后用丙氨酸代替的突变体（S760A）用丙氨酸代替S760，然后用丙氨酸代替S760，以防止磷酸化，然后用32p-labe的ATP转染了32p-lab trag thrag tht的基因，并掺入了phand，并将其与phatemepie抗衡。 GIP及其放射性使用自动载体进行了比较和定量。基因转移方法使用一种方法，其中基因被迫通过脂肪触发瞬时表达，这已被证明是实验性的。