Comprehensive analysis of host signaling infected by periodontopathogenic bacteria.

牙周病原菌感染宿主信号的综合分析。

• 批准号: 22K09980
• 负责人: 大嶋 淳
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09980/
• 关键词: 歯学; 口腔細菌学; 微生物学; 免疫学

申請者らはこれまでに、主要な歯周病原性細菌であるPorphyromonas gingivalisが、感染した宿主細胞において他の歯周病原性細菌感染時には見られない特徴的な遺伝子発現プロファイルを生じさせることを明らかにしてきた。そこで本研究では、歯周病の新規の創薬・治療戦略の創成を念頭に、低分子シグナル阻害化合物を用いたスクリーニングおよび転写産物の網羅的な解析手法を用いて、P. gingivalisによる病原性発揮メカニズムにおける宿主シグナルの全容解明を試みた。まずは低分子シグナル阻害化合物ライブラリーの応用により、P. gingivalisによって引き起こされるシグナルがどのように伝達されているのかの同定を試みた。細胞に対する試薬処理および細菌感染は96穴マイクロプレート上で行い、SuperPrep Cell Lysis RT Kit for qPCR (東洋紡) を用いてそのままRNA抽出、cDNA合成を行うことで迅速かつ効率的にリアルタイムPCR解析を行った。解析の結果、antitumor (thymidylate synthetase) 5-FU、antitumor (tubulin)：Vinblastine sulfate、PKG阻害薬Rp-8-CPT-cGMPS、Survivin阻害薬YM-155など複数の薬剤に本菌依存的なインターフェロンシグナル抑制に対する阻害効果が認められた。しかし、いずれの薬剤も細胞毒性が強く、候補シグナルを絞り込んでいくためには今後さらなるより特異的な解析が必要であると考えられた。

申请人先前已经表明，主要的牙周致病细菌，斑岩牙龈牙龈会产生独特的基因表达谱，在感染的宿主细胞中未在感染其他牙周致病性细菌细菌感染期间发现。因此，在这项研究中，我们尝试使用小分子信号抑制剂化合物进行筛查，并对转录本的全面分析，阐明牙龈疟原假单胞菌的致病性劳累机理的全部程度，考虑到创造新的药物发现和治疗牙周疾病策略。首先，我们尝试确定牙龈疟原虫引起的信号是如何通过应用小分子信号抑制剂化合物库来传播的。用试剂和细菌感染在96孔微孔板上处理细胞，并通过使用QPCR（ToyoBo）的SuperPREP细胞裂解RT试剂盒直接提取RNA和cDNA合成来快速有效地进行实时PCR分析。分析表明，多种药物，包括抗肿瘤（甲基甲酯合成酶）5-FU，抗肿瘤（微管蛋白）：硫酸葡萄蛋白，PKG抑制剂RP-8-CPT-CGMP和Survivin抑制剂YM-155，对抑制了对抗干扰素抑制的抑制作用。但是，两种药物都具有高度的细胞毒性，并且人们认为将来需要进一步的特定分析，以缩小候选信号的缩小。