p38MAPKを介した網膜ミュラー細胞の増殖とグリオーシスの制御機構の解明

阐明p38MAPK介导的视网膜Muller细胞增殖和神经胶质增生的控制机制

基本信息

批准号：
22K09842
负责人：
藤枝弘樹
金额：
$ 2.41万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09842/
关键词：
網膜ミュラーグリア増殖グリオーシス p38 ミュラー細胞

项目摘要

本研究の目的は、網膜傷害後に起きるミュラーグリアの増殖、脱分化、反応性グリオーシスの相互関連性とその仲介因子としてのp38の役割を明らかにすることにある。本年度は、ミュラーグリアの増殖と遺伝子発現を定量的に解析するための新規実験モデルを確立し、さらに阻害剤を用いたp38の機能解析を行った。我々はこれまでげっ歯類にメチルニトロソ尿素（MNU）を腹腔内投与することで視細胞変性モデルを作製し、傷害後のミュラーグリア増殖制御機構を解析してきたが、新たにメタンスルホン酸メチル（MMS）を用いた視細胞変性モデルの確立を進めており、網膜傷害およびミュラーグリアの反応性増殖の経過がMNUモデルとMMSモデルで異なること、MMS毒性に対する神経細胞の感受性がマウスとラットで異なることを明らかにした。また、MMS投与後に網膜を器官培養する実験系を確立するとともに、チミジンブロック法によりミュラーグリアの増殖を阻害し、細胞周期に依存した遺伝子発現変化を同定するための実験モデルを作製した。さらにミュラーグリアを分散培養により増殖させ、培養ミュラーグリアの核内タンパク質発現を画像解析により定量化し、種々の制御因子発現と細胞周期との関連性を解析する手法を確立することができた。これらの新規に確立した実験系を用いて、p38の機能解析を開始した。MMS投与後のラット網膜をp38阻害因子の存在下で器官培養したところ、ミュラーグリアの増殖および変性領域への細胞移動がp38阻害により有意に亢進することが明らかになった。したがって、p38が網膜傷害後のミュラーグリアの増殖および細胞移動を抑制的に制御していることが示された。

这项研究的目的是阐明视网膜损伤后发生的穆尔氏菌的增殖，去分化和反应性神经胶质之间的相互关系，以及p38作为介体的作用。今年，我们建立了一个新的实验模型，用于定量分析毛果植物增殖和基因表达，并进一步分析了使用抑制剂对p38的功能分析。我们以前曾通过腹膜内给予啮齿动物的甲基硝基库（MNU）创建了一种光感受器变性模型，并分析了损伤后控制Mullerglia生长的机制。现在，我们使用甲基磺酸甲酯（MMS）开发了一种新的光感受器变性模型，并揭示了MNU和MMS模型之间的视网膜损伤和毛果脂蛋白的反应性增殖，并且对MMS毒性的神经元细胞敏感性在小鼠和大鼠中是不同的。此外，建立了一个实验系统，在该系统中，在MMS给药后培养了视网膜，并创建了一个实验模型来抑制Mullerglia的生长，该模型通过使用胸苷块方法鉴定基因表达中细胞周期依赖性变化。此外，Müllerglia是通过分散培养物种植的，并且通过图像分析量化了培养的mullerglia中核蛋白的表达，并分析了各种调节因子的表达与细胞周期的表达之间的关系。使用这些新建立的实验系统，启动了p38的功能分析。当在p38抑制剂存在下培养MMS后的大鼠视网膜时，据表明，p38抑制作用显着增加了mullerglia和细胞迁移到堕落区域的生长。因此，据表明，p38抑制了视网膜损伤后毛虫的增殖和细胞迁移。