線維柱帯細胞の圧ストレス応答と房水流出抵抗の関係

小梁网细胞压力应激反应与房水流出阻力的关系

• 批准号: 22K09794
• 负责人: 藤本 智和
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09794/
• 关键词: 線維柱体細胞; 眼圧; 緑内障; 線維柱帯細胞; 圧ストレス

本研究では眼圧変化による流出路組織の変化に焦点を当て、線維柱帯細胞の圧負荷により生じる変化を中心に、特に線維柱帯細胞の圧依存的な眼圧調節機構とエピジェネティクス制御の関係に焦点を当てて解析を実施することを目的としている。本研究開始前の予備検討時に30mmHg、72時間の加圧負荷による細胞数の減少が認められたため、再現性確認のため同一条件で検討したところ、使用する線維柱帯細胞のロット間のばらつきもあり有意な細胞数の減少は再現できなかった。そこで、加圧負荷を1、3、5、7日間で検討した結果、細胞のロット間でのばらつきはあるが、7日間、30mmHgの加圧負荷で細胞の増加抑制が認められた。加圧負荷した細胞のタンパクを回収しウエスタンブロットを実施した結果、p21の発現が有意に上昇していた。p21はサイクリン依存性キナーゼ阻害因子として働くタンパクであり、細胞老化との関係も深い。そこで細胞老化マーカーであるSA-β-galやγ-H2A.Xの発現について検討したが、加圧負荷による細胞老化マーカーの上昇は認められず、7日間の加圧負荷では細胞老化の進行は認められなかった。加圧負荷による線維柱帯細胞の増殖抑制は使用する線維柱帯細胞のロット間にばらつきがあったため、3ロットの線維柱帯細胞を使用し再検討を実施した。その結果、前回の検討と同様に細胞のロット間でのばらつきが大きく、加圧負荷により細胞増殖が抑制されるロットと、抑制されないロットが存在した。本年度の計画では、細胞増殖抑制が強く認められる加圧負荷条件下の線維柱帯細胞より回収したRNAを用いたRNA-seq解析を行う予定であったが、細胞のロット間差が大きいため解析の実施に至らなかった。

这项研究的重点是由于眼内压的变化而导致流出道组织的变化，并旨在进行分析，重点是小梁细胞的压力负载引起的变化，尤其是眼内压力调节压力依赖性机制与小梁细胞的表观遗传控制之间的关系。在本研究开始之前的初步研究中，由于30 mmHg的加压负载持续了72小时，观察到细胞数量的减少，并且当我们在相同条件下检查它以确认可重复可重复性时，大量小梁索细胞的变化很大，因此我们无法重现细胞数量的大量降低。因此，我们研究了1、3、5和7天的加压负荷，尽管细胞批之间存在变化，但细胞的增加被加压的30 mmHg加压7天抑制了7天。收集加压细胞的蛋白质并覆盖蛋白质，并显着增加p21的表达。 p21是一种充当细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的蛋白质，与细胞衰老密切相关。因此，我们研究了细胞衰老标志物SA-β-GAL和γ-H2A.x的表达，但由于压力负荷而没有观察到细胞衰老标记的增加，并且在压力加载7天下未观察到细胞衰老的进展。由于小梁和弦细胞通过加压载荷的增殖存在变化，因此使用了三个小梁和弦细胞来抑制小梁和弦细胞的增殖。结果，与先前的研究一样，细胞批之间存在很大的差异，并且有些人因压力负荷而抑制了细胞增殖，有些批次没有抑制。在今年的计划中，我们计划在强烈观察到细胞增殖抑制的压力载荷条件下，使用小梁小梁细胞收集的RNA进行RNA-seq分析，但是由于细胞批次之间的差异很大，因此无法实现分析。