線維柱帯細胞の圧ストレス応答と房水流出抵抗の関係

小梁网细胞压力应激反应与房水流出阻力的关系

• 批准号: 22K09794
• 负责人: 藤本 智和
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09794/
• 关键词: 線維柱体細胞; 眼圧; 緑内障; 線維柱帯細胞; 圧ストレス

本研究では眼圧変化による流出路組織の変化に焦点を当て、線維柱帯細胞の圧負荷により生じる変化を中心に、特に線維柱帯細胞の圧依存的な眼圧調節機構とエピジェネティクス制御の関係に焦点を当てて解析を実施することを目的としている。本研究開始前の予備検討時に30mmHg、72時間の加圧負荷による細胞数の減少が認められたため、再現性確認のため同一条件で検討したところ、使用する線維柱帯細胞のロット間のばらつきもあり有意な細胞数の減少は再現できなかった。そこで、加圧負荷を1、3、5、7日間で検討した結果、細胞のロット間でのばらつきはあるが、7日間、30mmHgの加圧負荷で細胞の増加抑制が認められた。加圧負荷した細胞のタンパクを回収しウエスタンブロットを実施した結果、p21の発現が有意に上昇していた。p21はサイクリン依存性キナーゼ阻害因子として働くタンパクであり、細胞老化との関係も深い。そこで細胞老化マーカーであるSA-β-galやγ-H2A.Xの発現について検討したが、加圧負荷による細胞老化マーカーの上昇は認められず、7日間の加圧負荷では細胞老化の進行は認められなかった。加圧負荷による線維柱帯細胞の増殖抑制は使用する線維柱帯細胞のロット間にばらつきがあったため、3ロットの線維柱帯細胞を使用し再検討を実施した。その結果、前回の検討と同様に細胞のロット間でのばらつきが大きく、加圧負荷により細胞増殖が抑制されるロットと、抑制されないロットが存在した。本年度の計画では、細胞増殖抑制が強く認められる加圧負荷条件下の線維柱帯細胞より回収したRNAを用いたRNA-seq解析を行う予定であったが、細胞のロット間差が大きいため解析の実施に至らなかった。

本研究重点关注眼压变化引起的流出道组织的变化，重点关注小梁网细胞压力过载引起的变化，特别是小梁网的压力依赖性眼压调节机制和表观遗传控制分析的目的是关注细胞之间的关系。在开始本研究之前的初步研究中，由于72小时30mmHg的压力负荷，观察到细胞数量减少，因此在相同条件下进行研究以确认再现性，结果发现批次之间存在差异然而，无法再现细胞数量的显着减少。因此，检查1、3、5和7天的压力负荷的结果发现，尽管细胞批次之间存在差异，但通过施加30mmHg的压力7天，细胞生长受到抑制。对从加压细胞中收集的蛋白质进行蛋白质印迹分析表明，p21 的表达显着增加。 p21是一种作为细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的蛋白质，与细胞衰老密切相关。因此，我们研究了细胞衰老标志物SA-β-gal和γ-H2A.X的表达，但没有观察到细胞衰老标志物因加压而增加，并且加压7天并没有抑制细胞衰老的进展。没有被认可。由于由于压力负荷而用于抑制小梁网细胞增殖的小梁网细胞的批次之间存在差异，因此使用三批小梁网细胞进行重新检查。结果，与之前的研究一样，细胞批次之间存在很大差异，存在通过压力负荷抑制细胞增殖的批次和未抑制细胞增殖的批次。今年的计划是使用在压力负荷条件下从小梁网细胞收集的RNA进行RNA-seq分析，在压力负荷条件下，细胞增殖受到强烈抑制，但由于细胞批次之间存在较大差异，因此无法进行分析。