悪性神経膠腫におけるテモゾロミド耐性獲得においてオートファジーが果たす役割の解明

阐明自噬在恶性胶质瘤获得替莫唑胺耐药中的作用

• 批准号: 22K09290
• 负责人: 米澤 大
• 金额: $ 2万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09290/
• 关键词: グリオーマ; オートファジー; テモゾロミド; 耐性機序

U251をtemozolomide (TMZ) 含有培地で培養し、限界希釈法にて単離したTMZ耐性株を樹立し、研究に用いた。U251および U251由来TMZ耐性株 (U251/TMZ-R) それぞれをTMZ含有培地で培養の後、autophagyの指標である、isoform B of microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ (LC3B-Ⅱ)、caspase-3をwestern blottingにて検出し、比較した。また、TMZ暴露後のLC3Bの凝集を蛍光顕微鏡にて観察した。さらに、autophagosomeとlysosomeの融合阻害剤であるbafilomycin A1 (BA) をTMZと併用時での検討を行った。細胞生存率の評価にはMTT assayを用いた。LC3B-Ⅱの増加およびLC3Bの凝集は、U251/TMZ-RではU251に比べ抑制されていた。cleaved caspase-3の出現は、U251でのLC3B-Ⅱの増加の後に観察されたが、U251/TMZ-Rでは観察されなかった。BA併用下では、U251/TMZ-RにおいてもTMZによるLC3B-Ⅱ増加は、U251と同様に誘導され、cleaved caspase-3の出現および生存率の低下が観察された。

U251在含有替莫唑胺（TMZ）的培养基中培养，并在研究中建立了通过限制稀释的抗TMZ抗性菌株。在培养了含U251和U251衍生的TMZ抗性菌株（U251/TMZ-R）之后，在含TMZ的培养基中，自噬指示剂，微管相关蛋白Libtle链3-II（LC3B-II）（LC3B-II），caspase-3，Caspase-3，Caspase-3，Caspase-3，Caspase-3，casspase-3，通过蛋白质印刷和比较检测。此外，在荧光显微镜下观察到暴露于TMZ后LC3B的聚集。此外，当与TMZ结合使用时，研究了一种自噬体和溶酶体的融合抑制剂Bafilomycin A1（BA）。 MTT分析用于评估细胞活力。与U251相比，在U251/TMZ-R中，LC3B-II的增加和LC3B的聚集被抑制。在U251的LC3B-II增加后，观察到裂解的caspase-3的出现，但在U251/TMZ-R时观察到。在BA的综合使用中，U251/TMZ-R中TMZ诱导的LC3B-II的增加与U251相同，并且观察到裂解的caspase-3和存活率的外观降低。