脳死関連肺障害の病態解明と予防・治療法の開発ーNPY,VEGFと腸換気法の検討

阐明脑死亡相关肺部疾病的病理学并制定预防和治疗方法——NPY、VEGF和肠道通气方法的检查

基本信息

批准号：
22K09045
负责人：
西脇公俊
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

我々は、神経原性肺水腫の発生において、肺交感神経終末にカテコールアミンと共存する神経ペプチドY（NPY）による神経性調節が細胞透過性に関与すること、および肺（気管支粘膜、平滑筋、肺胞毛細血管内皮細胞）における血管内皮細胞増殖因子（vascular endothelial growth factor: VEGF）の発現が肺血管透過性亢進に深く関与していることを明らかにしてきた。本研究の目的は、in vitro肺細胞透過性評価系とげっ歯類を用いたin vivo脳死誘発肺水腫モデル系を確立し、NPYやVEGFの作用機序を明らかにすることである。また、脳死患者の肺障害の予防・治療法の一つとして、「腸換気法」による肺保護効果についても検討する。本年度は、ラットから単離した肺胞上皮細胞を使用するin vitro肺細胞透過性評価系とin vivo脳死誘発肺水腫モデルの構築及び「腸換気法」の有用性の検討を試みた。In vitro肺細胞透過性評価系には、ラットから単離した2型肺胞上皮細胞を1型肺胞上皮細胞に分化した初代細胞を用いることにした。しかしながら、2型肺胞上皮細胞の選択的回収がうまくできなかった。そのため、単離後の細胞分化、使用する培地、最適な細胞播種密度、細胞培養期間などについても検討できなかった。In vivo脳死誘発肺水腫モデルは、ラット頭蓋内にバルーンカテーテルを挿入し、バルーン内に生理食塩水を注入することにより頭蓋内圧を上昇させ、脳幹部にヘルニアを起こすことにより作製した。同モデルからの気管支肺胞洗浄液（Bronchoalveolar lavage fluid: BALF）採取法を確立し、サンプル中の総蛋白を含む生化学的検査法を検討中である。

我们已经证明，肺交感神经终末中与儿茶酚胺共存的神经肽Y（NPY）的神经源调节与细胞渗透性有关，并且血管内皮生长因子（VEGF）的表达在肺中（肺癌，平滑肌肉）的肺部的肺部杂种，脉络膜繁殖层的细胞中，渗透性。这项研究的目的是建立一种使用啮齿动物的体外肺细胞通透性评估系统和体内脑死亡诱导的肺水肿模型系统，并阐明NPY和VEGF的作用机理。此外，我们还将将肠道通气的肺部保护作用视为脑死患者肺部疾病的预防和治疗之一。今年，我们试图使用从大鼠分离的肺泡上皮细胞以及脑死亡诱导的肺水肿的体内模型，并研究“肠道通气”的实用性。在体外肺部细胞渗透率评估系统中，从大鼠分离的2型肺泡上皮细胞被分化为1型肺泡上皮细胞的主要细胞。但是，选择性恢复2型肺泡上皮细胞并不成功。因此，不可能研究分离后的细胞分化，要使用的培养基，最佳细胞播种密度和细胞培养期。体内脑死亡引起的肺水肿模型是通过将气球导管插入大鼠头骨中，并将盐水注入气球中以增加颅内压中的，从而创建了脑茎的疝气。通过同一模型建立了支气管肺泡灌洗液（BALF）收集方法，并研究了包括样品中总蛋白在内的生化测试方法。