大伏在静脈グラフトの保存液と水素ガスが及ぼす影響の研究

保存液和氢气对大隐静脉移植物影响的研究

基本信息

批准号：
22K08962
负责人：
齋藤雄平
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08962/
关键词：
大伏在静脈水素冠動脈バイパス術一酸化窒素内皮障害

项目摘要

本研究は、水素を含んだグラフト保存液の効果としてグラフト血管に対する侵襲の軽減作用を、グラフト血管の機能にフォーカスして基礎実験的に証明し、その成果を臨床応用することを目的とする。水素の虚血再灌流障害の軽減や抗炎症作用は、グラフト血管に対する侵襲軽減のメカニズムとなり得るのではないかと考えられる。実際の患者から採取した大伏在静脈のグラフト血管保存液に水素ガスを使用し「水素ガス添加・非添加」での血管の反応性の差異を下記の方法で検討する。①ホルマリン固定した2種のグラフトに、下記の抗体を用いて免疫染色・ウェスタンブロットを実施し、主に内皮細胞の機能や血管の内膜・中膜・外膜の状態を検討(CD34、vWF、Akt、phosphorylated Akt、eNOS、phosphorylated eNOS、Klf4、myocardin、VCAM-1)。②凍結保存したグラフトにDHE 染色を実施し、血管壁の酸化ストレスの指標とする。③氷冷クレブス/培養液中で保存したグラフトを以下の方法で検討。ア) 血管張力測定：Phenyrephrine 投与で血管収縮能を評価：Acethylcholine およびSpermine/NONOate投与で血管拡張能を評価。イ) 培養液中のNO2/NO3 測定：NO2をNO3へと還元酵素を用いて還元し、NO3 を定量し、水素が添加された血管の方がNO の産生が優れていることを示す。ウ）培養液中のアディポカイン測定：Non-touch techniqueにより採取された血管には脂肪を含めた血管周囲組織が付着しており、水素の有無により脂肪から産生されるアディポカインに差があるかELIZAで測定。エ) 血管内皮細胞の遊走・増殖実験：水素を添加した血管の方が内皮細胞の増殖能が高いことを示す。上記に関して、現在、①，②に対する実験の準備中である。

本研究的目的是通过基础实验证明含氢移植物保存液对减少移植血管侵袭的作用，重点关注移植血管的功能，并将结果应用于临床。认为氢气减轻缺血再灌注损伤和抗炎作用可能是减少移植血管侵袭的机制。在从实际患者采集的大隐静脉移植血管的保存液中使用氢气，并使用以下方法研究添加和不添加氢气的血管反应性的差异。 ①使用下列抗体对两种福尔马林固定的移植物进行免疫染色和Western blotting，主要检查内皮细胞的功能和血管内膜、中膜、外膜的状态（CD34、vWF等）。）、Akt、磷酸化 Akt、eNOS、磷酸化 eNOS、Klf4、心肌素、VCAM-1）。 ② 对冻存的移植物进行 DHE 染色，作为血管壁氧化应激的指标。 ③ 使用以下方法检查储存在冰冷的 Krebs/培养基中的移植物。 a) 血管张力的测量：通过施用去氧肾上腺素评价血管收缩能力；通过施用乙酰胆碱和精胺/NONOate评价血管舒张能力。 b)培养液中NO2/NO3的测量：用还原酶将NO2还原为NO3，对NO3进行定量，结果显示添加了氢的血管产生更好的NO。 C) 培养基中脂肪因子的测量：使用非接触技术收集的血管附着有血管周围组织，包括脂肪，并且使用 ELIZA 来确定由脂肪产生的脂肪因子是否存在差异，具体取决于是否存在或不存在。没有氢测量。 d)血管内皮细胞迁移/增殖实验：表明加氢血管具有较高的内皮细胞增殖能力。针对上述情况，我们目前正在准备①和②的实验。