肝癌と膵癌における核内受容体LRH1異常リン酸化の解明

肝癌和胰腺癌中核受体LRH1异常磷酸化的阐明

• 批准号: 22K08896
• 负责人: 西間木 淳
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08896/
• 关键词: 肝癌; 膵癌; LRH1; 異常リン酸化; 核内受容体

膵癌と肝癌は予後不良で、新規治療法や予後不良例を抽出するバイオマーカーの開発が嘱望されている。新規のAKT依存性核内受容体セリン・リン酸化機構を解明し、これが子宮体癌と乳癌の悪性形質を増強することを明らかになり、このリン酸化標的セリンは膵癌や肝癌で異常発現し、これらの発現や進展に寄与する肝受容体ホモログ-1 (LRH1)でも保存されていることが解った。LRH1の異常リン酸化体pS510-LRH1が新規診断マーカーおよび治療標的として有望ではないかと考え、これを特異的に認識するモノクローナル抗体を独自に開発した。具体的には目的のセリンリン酸化を含むペプチドをフトイント不完全アジュバントでミセル化した後にラット足底部に免疫した。2週間後に腸骨リンパ節よりリンパ球を単離し、マウス骨髄腫細胞とポリエチレングリコール法で細胞融合してハイブリドーマを得た。その中から1) ELISAにおいてリン酸化ペプチドに反応を示すが非リン酸化ペプチドに反応を示さないクローン、2) 免疫染色において293Tリン酸化模倣体(293T+LRH1S510E)に反応を示す一方で非リン酸化体(293T+LRH1S510A)に反応を示さないクローンを選択した。さらにラムダフォスファターゼを用いた脱リン酸化ELISA、、免疫染色を施行し、pS510-LRH1特異的に反応するクローンを樹立した。そこで、本抗体を用いて肝癌157例の手術検体を用いて免疫染色を行ったところ、腫瘍細胞の核に様々な強度で染色が認められた。Immunoreactivity Scoreを用いて低染色群（n=112）、高染色群（n=45）に分けて予後解析を行ったところ、pS510-LRH1の高染色群は低染色群に比して最初までの期間の短縮が示唆された。また単変量解析、多変量解析からpS510-LRH1が予後不良因子になることが明らかとなった。

胰腺癌和肝癌的预后较差，并且有强烈的渴望开发新的治疗方法和生物标志物，以提取不良的预后病例。阐明了新型的Akt依赖性核受体丝氨酸蛋白磷酸化机制，表明这增强了子宫内膜和乳腺癌的恶性特征，并且这种磷酸化靶标丝氨酸在胰腺和肝癌中异常表达，并且在Liver Firver Foccoror-1中也保留了在Liver Hoccoror-1（Liver Hoccoror-1（LRRH）中（LRRH1），这也是贡献的，并撰写了他们的表达。我们认为异常的磷酸化LRH1 PS510-LRH1可能是一种新颖的诊断标记和治疗靶标，并且我们独立地开发了一种专门识别这一点的单克隆抗体。具体而言，用FT-INT不完全辅助剂将含有丝氨酸磷酸化的靶肽被胶束，然后将大鼠的鞋底免疫。两周后，使用聚乙二醇方法从Iliac淋巴结中分离出淋巴细胞，并与小鼠骨髓瘤细胞融合以获得杂交瘤。其中，1）对ELISA中磷酸化的肽反应但对非磷酸化肽反应的克隆，以及2）对293T磷酸化模拟物反应的克隆（293T+LRH1S510E），而不是对非磷酸化（293t+LRH1S510A）。此外，还进行了使用Lambda磷酸酶并进行免疫染色的去磷酸化的ELISA，并建立了在PS510-LRH1中特别反应的克隆。因此，使用该抗体使用157个手术标本的肝癌进行免疫染色，并在具有各种强度的肿瘤细胞核中观察到染色。使用免疫反应性评分进行预后分析，分为低染色组（n = 112）和高染色组（n = 45），并建议与低染色组相比，PS510-LRH1高染色组的开始时间更短。此外，单变量和多变量分析表明，PS510-LRH1是一个不良的预后因素。