Elucidation of Epithelial Dysfunction in Response to Intestinal Microbiota in Inflammatory Bowel Diseases

阐明炎症性肠病中肠道微生物群的上皮功能障碍

• 批准号: 22K08772
• 负责人: 水島 恒和
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08772/
• 关键词: 炎症性腸疾患; 腸管上皮細胞; RNA sequence解析; 腸内細菌叢

炎症性腸疾患(Inflammatory Bowel Diseases:IBD)は消化管に原因不明の炎症をおこす慢性疾患であり、腸内細菌叢に対する免疫応答の異常が、IBDの病因に重要な役割を果たしていることが明らかになってきている。腸管内では1層の腸管上皮細胞が腸内細菌叢と(腸管)免疫細胞を隔てており、バリアとして重要な役割を担っている。IBDの病因において腸管上皮が腸内細菌叢と(腸管)免疫細胞の関係にどの様な影響を及ぼしているかは、明らかではない。本研究では、一時的人工肛門造設状態という外科的に腸内細菌叢の影響がコントロールされた特殊な状態の手術検体を解析することにより、IBDにおける腸内細菌叢に対する腸管上皮の変化やバリア機能への影響を明らかにし、バリア機能制御による新規治療法開発の可能性を探索することを目的とした。1年目は腸内細菌叢とIBDに関する先行研究と同様に、人工肛門が造設された患者の人工肛門閉鎖時に採取される手術検体を用いて解析を行った。健常人(直腸癌に対して一時的人工肛門造設を伴う切除術が施行された患者)の人工肛門口側腸管(使用腸管)と肛門側腸管(空置腸管)から腸管粘膜を採取し、得られた腸管粘膜から、Flow Cytometryを用いて腸管上皮細胞(CD45+EpCAM+細胞)をソーティングした。上皮細胞より遺伝子を抽出し、NGS(Illumina HiSeq System)を用いてRNA sequence解析を行いRNA sequence解析の結果より、腸管上皮で発現が変化する遺伝子(Pathway)を抽出した。また、CD患者においては通常の腸管切除時に採取される手術検体を用いて、同様の方法で腸管上皮の遺伝子発現を解析した。CD患者3例+人工肛門機能腸管3例+空置腸管3例のデータを取得でき、今後サンプル数を増やして解析する予定である

炎症性肠病（IBD）是一种慢性疾病，会引起未知原因胃肠道炎的炎症，并且很明显，对肠道菌群的免疫反应异常在IBD的发病机理中起重要作用。在肠道中，一层肠上皮细胞分离肠道菌群和（肠道）免疫细胞，并作为屏障起着重要作用。尚不清楚肠上皮如何影响IBD发病机理中肠道菌群与（肠道）免疫细胞之间的关系。这项研究旨在阐明肠上皮的变化以及肠道菌群在IBD中的影响以及通过分析手术控制的手术性结肠切除术状态，并探索使用障碍物功能控制开发新治疗方法的可能性，以及对屏障功能的影响。在第一年，类似于先前关于肠道菌群和IBD的研究，在结肠造口术患有结肠造口术的患者结肠造口术期间使用手术标本进行了分析。从结肠切开术侧肠道（使用的肠道）和健康个体的肛门侧肠道（使用肠直肠癌临时切除的患者）和使用肠上皮细胞（CD45+ EPCAM+细胞）分类的是肠道的肠道（CD545+ EPCAM+细胞），从而将肠道粘膜收集。从上皮细胞中提取基因，使用NGS（Illumina HISEQ系统）进行RNA序列分析，并从RNA序列分析的结果，RNA序列分析的结果，基因在肠上皮（途径）中表达的基因改变。在CD患者中，使用在正常肠切除过程中收集的手术标本分析肠上皮的基因表达。可以获得3例CD患者，3次结肠造口术和3次系数的数据，我们计划将来增加样品数量。