Nrf2を介したTAM-cancerクロストークによる肝癌薬剤耐性機序の解明

Nrf2介导的TAM-癌症串扰阐明肝癌耐药机制

基本信息

批准号：
22K08753
负责人：
高須千絵
金额：
$ 2.75万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08753/
关键词：
TME 癌微小環境レンバチニブ Nrf2 TAM-cancer 肝癌薬剤耐性機序肝細胞癌 HCC

项目摘要

1)　薬剤耐性肝癌・膵癌細胞株におけるNrf2の役割の解明1.レンバチニブ耐性肝癌細胞株の確立と特性の確認：肝癌細胞株(PLC, Huh7)を使用。レンバチニブを含む培地で培養し、濃度を徐々に上昇させることにより耐性株を樹立し、耐性株で親株に比し耐性、悪性度が増大している事を確認した。2.Nrf2ノックダウンによる細胞株の特性の変化に関する検討：耐性株が獲得した特性において、Nrf2 pathwayの影響を検討するために、Si-RNAによりNrf2をノックダウンした耐性株を用いて、上記耐性・悪性度上昇がキャンセルされる事を確認すた。3.レンバチニブ耐性肝癌細胞株におけるmiRNA発現に関する検討：薬剤耐性肝癌細胞株(PLC, Huh7)で24hr培養によるCancer condition medium（Cancer-CM）から市販のエクソソーム回収kitを用いてmicroRNAを抽出し、Nrf2に関連するmicroRNA-Xを同定した。2) 薬剤耐性細胞株由来microRNA-XにおけるNrf2 pathwayの検討薬剤耐性肝癌細胞株(PLC, Huh7)で24hr培養によるCancer condition medium（Cancer-CM）を作成し、肝癌細胞株を作成し、耐性度・悪性度の特性につき下記検討を行い、recipient側でも耐性と悪性度が上昇している事を確認した。

1）阐明Nrf2在耐药肝癌/胰腺癌细胞系中的作用1.乐伐替尼耐药肝癌细胞系特征的建立和确认：使用肝癌细胞系（PLC，Huh7）。通过在含有乐伐替尼的培养基中培养并逐渐增加浓度建立了耐药菌株，并证实该耐药菌株与亲本菌株相比具有增强的耐药性和恶性程度。 2.检查Nrf2敲低引起的细胞系特征的变化：为了检查Nrf2途径对抗性菌株获得的特性的影响，我们使用了用Si-RNA敲低Nrf2的抗性菌株——证实了这一点。恶性肿瘤的增加被取消。 3.乐伐替尼耐药肝癌细胞系中miRNA表达的研究：使用市售的外泌体收集试剂盒从耐药肝癌细胞系（PLC，Huh7）中培养24小时的癌症条件培养基（Cancer-CM）中提取MicroRNA，我们鉴定出与 Nrf2 相关的 microRNA-X 2)通过培养耐药性肝癌细胞系(PLC，Huh7)24小时而产生来自耐药性细胞系的microRNA-X中的Nrf2通路的检查，肝癌细胞系。制作了抗性，并确定了抗性的程度。・针对恶性的特征进行了以下研究，确认了受者侧的抗性和恶性也在增加。