Development of cancer immunotherapy using non-receptor type immune checkpoint inhibitor targeting PTPN3

以PTPN3为靶点的非受体型免疫检查点抑制剂开发癌症免疫疗法

• 批准号: 22K08715
• 负责人: 中山 和典
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08715/
• 关键词: PTPN3; 非抗体型免疫チェックポイント阻害剤; 癌免疫治療; 活性化リンパ球; 細胞傷害性Tリンパ球; CD8; 樹状細胞; CD4; 腫瘍免疫

本研究の目的は、protein tyrosine phosphatase non-receptor type 3 (PTPN3)を標的とする非抗体型免疫チェックポイント阻害剤（低分子化合物）を用いた難治性固形癌に対する新規癌免疫治療を創生することである。本年度は低分子化合物スクリーニングを行うに当たり、その評価方法について検討した。目標はPTPN3を抑制することによりリンパ球を増殖させる化合物の探索であるが、多数のプレートにまくだけのヒトリンパ球を獲得することが困難であったので、PTPN3抑制により増殖が抑制される癌細胞株が分かっていることもあり、まず細胞を扱いやすい癌細胞を用いて化合物をピックアップできないかを検討した。PANC-1、FaDuを96穴プレートに3000個、4000個、5000個とまいて、5日間までの増殖を検討して、3000個が妥当であることを確認した。培養日数は2日以上が望ましいという結果であったが、contaminationのリスクを考えて、まずは2日間の培養で行うこととした。また、negative controlとして、PTPN3 siRNAを導入した細胞を準備したが、導入の方法として別フラスコでsiRNAを導入した細胞をまく方法と、siRNAの入った培養液で96穴で培養する方法の2通りで行い、後者の方法が誤差が少ないことが分かった。プレート数が多いため、細胞増殖試験（WST1試験）を時間誤差なく遂行できるかが課題であるが、WST1を添加後に測定時間を1.5-2.0時間とすれば遂行可能ではないかと考えている。以上より、まくべき細胞数や培養日数などスクリーニングの細かな条件設定が確定しつつある。今後、九州大学薬学研究院、山下講師に約700種の化合物をご提供いただき、初回の薬物スクリーニングを行う予定としている。

这项研究的目的是使用非抗体免疫检查点抑制剂（小分子化合物）靶向蛋白质酪氨酸磷酸酶非受体3型（PTPN3），为难治性固体癌症创建一种新型的癌症免疫治疗治疗。今年，当筛选小分子化合物时，我们讨论了评估方法。目的是寻找通过抑制PTPN3增殖的化合物，但是很难获得只能分布在许多板上的人类淋巴细胞，因此我们首先检查是否可以使用易于使用癌细胞处理的癌细胞来拾取化合物。 Panc-1和Fadu被包裹在96孔的3,000、4,000和5,000板上，并调查了5天的扩散，并确认3,000个合理。结果表明，培养日期超过两天，但是考虑到污染的风险，首先决定进行两天的培养。此外，将PTPN3 siRNA引入的细胞作为阴性对照制备，作为一种引入的方法，有两种方法：一种倒入细胞的方法，在单独的烧瓶中引入了siRNA，在单独的烧瓶中引入了siRNA的方法，在含有96孔的sirna培养基中培养的方法，并且发现后者的方法很少。因为有很多板，所以挑战是细胞增殖测试（WST1测试）是否可以在没有时间错误的情况下进行，但是我们认为，如果测量时间为1.5-2.0小时，则可以进行添加WST1。基于上述，已经确定了详细的筛查条件，例如要煮熟的细胞数量和培养天数。将来，我们计划向九州大学药学学院的Yamashita讲师提供大约700种化合物，并进行第一次药物筛查。

项目成果

頭頸部癌における PTPN3 の生物学的意義の解析

PTPN3在头颈癌中的生物学意义分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 益田 昌吾;岩本 直也;坂梨 渓太;森崎 晋史;那 琳;長尾 晋次郎;藤村 晶子;大西 秀哉
• 通讯作者: 大西 秀哉

新規治療法開発のための膵癌におけるチロシン脱リン酸化酵素PTPN3の生物学的意義解析

酪氨酸去磷酸化酶PTPN3在胰腺癌中的生物学意义分析对新疗法开发的意义

• 发表时间: 2022
• 作者: 大西秀哉;山崎章生;中村雅史
• 通讯作者: 中村雅史

チロシン脱リン酸化酵素PTPN3 を標的とした肺神経内分泌腫瘍に対する新規癌免疫治療の開発

开发针对酪氨酸去磷酸化酶 PTPN3 的新型肺神经内分泌肿瘤癌症免疫疗法

• 发表时间: 2022
• 作者: 古賀智子;大西秀哉;岩本直也;長尾晋次郎;那琳;益田昌吾;西山憲一;小島雅之;中村雅史
• 通讯作者: 中村雅史

チロシン脱リン酸化酵素PTPN3 を抑制する癌免疫治療の可能性

通过抑制酪氨酸去磷酸化酶 PTPN3 进行癌症免疫治疗的可能性

• 发表时间: 2022
• 作者: 岩本直也;大西秀哉;長尾晋次郞;古賀智子;梅林雅代;森崎隆;中村雅史
• 通讯作者: 中村雅史

Cancer therapy that targets the Hedgehog signaling pathway considering the cancer microenvironment

• DOI: 10.3892/or.2022.8304
• 发表时间: 2022-05-01
• 期刊: ONCOLOGY REPORTS
• 影响因子: 4.2
• 作者: Onishi，Hideya;Nakamura，Katsuya;Yamasaki，Akio
• 通讯作者: Yamasaki，Akio