安全性の高い間葉系幹細胞の細胞フリー療法の開発：培養上清の抗腫瘍効果

开发高度安全的无细胞间充质干细胞疗法：培养上清液的抗肿瘤作用

基本信息

批准号：
22K08722
负责人：
米戸敏彦
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08722/
关键词：
間葉系幹細胞培養上清抗腫瘍効果

项目摘要

2022年度は、ヒト骨髄由来間葉系幹細胞の培養上清（MSC-CM）の腫瘍増殖への効果について検討した。① MSC-CMの腫瘍増殖への効果：まず、ヒト多発性骨髄腫RPMI8226、ヒト乳癌MCF-7、ヒト肺癌A549、マウス扁平上皮癌SSCVIIのがん細胞株に1%FBS存在下でMSC-CMを0~40%加え72時間培養し、腫瘍増殖を生存細胞由来のATP量を発光強度で測定した。その結果、いずれの細胞株においてもこのトロールの培地に比べ、MSC-CMの濃度依存的に腫瘍の増殖が抑制された。次に、マウスSSCVII腫瘍をC3Hマウスに移植後腫瘍が触れるぐらいになった5日後から、MSC-CMおよびそのコントロール培地をその近傍に100 μl5日間連続皮内投与すると、MSC-CM投与により有意に腫瘍径の増大が抑制された。この時、腫瘍組織の新生血管のマーカーでCD31に対する抗体を用いた組織学的解析により新生血管の数も減少していた。② MSC-CMによる腫瘍増殖抑制効果の作用機序の解析：MSC-CM中の液性因子について、抗体アレイを用いて網羅的に定量すると、腫瘍増殖の抑制や血管新生の増強効果も報告されているInsulin-like growth factor binding protein（IGFBP）-3,4,6が多く含まれていた。そこで、次に、これらの組換え蛋白質を用いて、上記の腫瘍増殖への影響を調べると、程度の差はあるが、IGFBP-4や-6が抑制効果を示した。さらに、それぞれの抗体を用いて免疫除去したMSC-CMおよびコントロール抗体で処理したMSC-CMを用いて腫瘍増殖への影響を調べると、IGFBP-4を免疫除去すると腫瘍増殖の抑制効果が強く減弱することがわかった。これらの結果より、MSC-CMは、主にIGFBP-4を介して腫瘍増殖を抑制することが示唆された。

在2022财年，我们研究了人骨髓衍生的间充质干细胞对肿瘤生长的培养上清液（MSC-CM）的影响。 1）MSC-CM对肿瘤生长的影响：首先将0-40％的MSC-CM添加到人类多发性骨髓瘤RPMI8226，人乳腺癌MCF-7，人肺癌A549和小鼠鳞状细胞癌SSCVII的癌细胞系中，并通过通过对肿瘤的量来测量肿瘤量，并通过在P上测量肿瘤量，并通过对肿瘤生长进行测量。结果，与TROL培养基相比，在两种细胞系中，肿瘤生长在两种细胞系中均以浓度依赖性抑制。接下来，在将小鼠SSCVII肿瘤植入C3H小鼠中五天后，将100μL的MSC-CM及其对照培养基在附近施用了5天，而MSC-CM给药可显着抑制肿瘤直径的增加。目前，使用与CD31的抗体作为肿瘤组织中新血管化血管的标志物的组织学分析，新血管化血管的数量也减少了。 2）分析MSC-CM肿瘤生长抑制作用的作用机制：当使用抗体阵列全面地对MSC-CM中的体液因子进行了全面量化时，它们包含大量胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）-3、4、6，据报道，这也已据报道，这也已被抑制了胰蛋白的生长和抑制tumoreSenease and tumorease and tumoreSense and tumoreSense。接下来，当这些重组蛋白用于研究上述肿瘤生长的影响时，IGFBP -4和-6显示出抑制作用，尽管程度差异。此外，当使用使用每种抗体和用对照抗体处理的MSC-CM进行MSC-CM免疫部门检查对肿瘤生长的影响时，发现IGFBP-4的免疫反应严重减弱了抑制肿瘤生长的作用。这些结果表明，MSC-CM主要通过IGFBP-4抑制肿瘤生长。