脂肪幹細胞由来Schwann様細胞の骨盤内臓神経再生促進効果に関する研究

脂肪干细胞源雪旺样细胞促进盆腔内脏神经再生作用的研究

基本信息

批准号：
22K08713
负责人：
徳永卓哉
金额：
$ 2.75万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

進行下部直腸癌に対する化学放射線療法や側方リンパ節郭清手技の進歩により、治療成績は向上している一方、骨盤内臓神経障害による術後排尿障害はQOL低下の一因となる。末梢神経再生にはSchwann細胞（SC）が重要な役割を担っているが、近年、脂肪由来間葉系幹細胞（ADSC）を用いた神経再生効果が注目されている。これまでに我々はADSCの分化誘導過程において、folic acid（FA）を加えた機能的なSchwann様細胞分化プロトコールを報告してきた。一方、Schwann細胞は神経修復過程において未熟な修復SCへと脱分化することが報告されているが、ADSCから分化誘導したSLCをどこまで分化させればより修復SCに類似した細胞になるかは不明である。今回SLCの分化度に注目し、発現するタンパク質、遺伝子を解析することで我々が作成したSLC(FA)の至適分化時間を検討する。そして最終的に術後排尿障害モデルにおける、臨床応用を目指した神経再生促進および排尿障害改善効果を確立する目的で本研究計画を立案した。ADSCからSLC(FA)への分化過程で培養時間別に3群に分け、それぞれの発現タンパク質、遺伝子を比較検討する。DRGニューロン細胞株とSLC(FA)を共培養し神経突起伸長効果を評価することで至適培養時間を明らかにする。In vivoで骨盤内臓神経を挫滅することで排尿障害（弛緩性神経因性膀胱）モデルラットを作成し、SLC(FA)投与による神経再生促進効果について検討する。〈結果〉1．ADSCからSchwann細胞へ分化誘導しPCRでS100の発現を確認しSLCを作成した。2．麻酔下に骨盤内臓神経を挫滅し排尿障害モデルラットを作成した。手術3週間後にCystometoryにて基礎圧力の上昇を確認した。また、HE染色では膀胱の肥大を認めた。

晚期下位直肠癌放化疗和侧方淋巴结清扫技术的进步改善了治疗效果，但盆腔内脏神经病变导致的术后排尿功能障碍导致生活质量下降。雪旺细胞（SC）在周围神经再生中发挥着重要作用，近年来，利用脂肪间充质干细胞（ADSC）的神经再生效果引起了人们的关注。到目前为止，我们已经报道了在 ADSC 分化诱导过程中使用叶酸（FA）的功能性雪旺样细胞分化方案。另一方面，有报道称雪旺细胞在神经修复过程中去分化为未成熟的修复SCs，但尚不清楚由ADSC诱导分化的SLC需要在多大程度上分化为更类似于修复SCs的细胞。是。这次，我们将重点关注SLC的分化程度，并通过分析表达的蛋白质和基因来检查我们创建的SLC（FA）的最佳分化时间。最后，我们设计了本研究计划，旨在建立术后排尿功能障碍模型中促进神经再生和改善排尿功能障碍的效果，并用于临床应用。在ADSC向SLC（FA）的分化过程中，我们根据培养时间将细胞分为三组，并比较和检查每组表达的蛋白质和基因。我们将通过共培养DRG神经元细胞系和SLC（FA）并评估神经突生长的效果来明确最佳培养时间。我们将通过在体内压碎盆腔内脏神经来创建泌尿功能障碍（神经源性膀胱松弛）的大鼠模型，并检查 SLC（FA）给药对神经再生的促进作用。 <结果> 1.诱导ADSC分化为雪旺细胞，通过PCR确认S100表达，并创建SLC。 2.在麻醉下挤压盆腔内脏神经，制作泌尿功能障碍大鼠模型。手术后三周，膀胱测压证实基础压增加。此外，HE染色显示膀胱增大。