Development of photocontrollable paramyxoviruses expressing the SARS-CoV-2 S protein.

表达 SARS-CoV-2 S 蛋白的光控副粘病毒的开发。

• 批准号: 22K08616
• 负责人: 大倉 喬
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08616/
• 关键词: SARS-CoV-2; 光制御型パラミクソウイルス; ワクチン; 中和エピトープ解析; 流行予測

本研究では、①BSL2でも使用可能なSARS-CoV-2のSタンパク質を発現する組換えパラミクソウイルスを作製し、さらに青色光照射時にのみウイルスが増殖する光応答性を付与することである。加えて、②このSタンパク質発現光応答性ウイルスを用い、SARS-CoV-2に対する中和抗体存在下でエスケープミュータントを作出し、そのSARS-CoV-2-Sタンパク質の機能獲得能を明らかにすることを試みている。これまでに、ミニゲノムアッセイにてセンダイウイルス（SeV）およびSeVウイルスと同じレスピロウイルス属に属する牛パラインフルエンザウイルス3型（BPIV3）のLタンパク質遺伝子内にそれぞれ光制御遺伝子を導入し、光制御が可能な箇所を検討した。SeVおよびBPIV3のLタンパク質内のドメイン間を介在するhinge1およびhinge2領域内にそれぞれ光制御遺伝子Magnetを挿入した変異体Lタンパク質を多数作製した。青色光照射時において、最もLタンパク質のポリメラーゼ活性が高い変異体をミニゲノムアッセイにて選別した。これら光制御遺伝子をLタンパク質遺伝子内に挿入した各ウイルスゲノムcDNA発現プラスミドを構築した。光制御型組換えウイルスの作出を試みたところ、SeVでは、組換えウイルスはレスキュー出来なかった一方、光制御型BPIV3の作出に成功した。

在这项研究中，我们将（1）创建一种表达 SARS-CoV-2 S 蛋白的重组副粘病毒，可用于 BSL2，并进一步赋予光响应性，使病毒仅在蓝光照射时才能增殖。此外，我们将使用这种表达 S 蛋白的光响应病毒在存在 SARS-CoV-2 中和抗体的情况下创建逃逸突变体，并揭示 SARS-CoV-2-S 蛋白获得功能的能力 I'。我正在尝试这样做。到目前为止，我们已经使用小基因组测定将光调节基因引入仙台病毒（SeV）和牛副流感病毒3型（BPIV3）的L蛋白基因中，我们考虑了与SeV病毒属于同一属的呼吸道病毒。我们创建了大量突变L蛋白，其中光调节基因Magnet分别插入SeV和BPIV3 L蛋白的铰链1和铰链2区域。使用小基因组测定选择了在蓝光照射下具有最高 L 蛋白聚合酶活性的突变体。我们构建了每个病毒基因组cDNA表达质粒，其中这些光调节基因被插入到L蛋白基因中。当我们试图创建光调节重组病毒时，我们无法用SeV拯救重组病毒，但我们成功创建了光调节BPIV3。

项目成果

Generation of a photocontrollable recombinant bovine parainfluenza virus type 3

• DOI: 10.1111/1348-0421.13052
• 发表时间: 2023-01-22
• 期刊: MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
• 影响因子: 2.6
• 作者: Okura，Takashi;Tahara，Maino;Takeda，Makoto
• 通讯作者: Takeda，Makoto