Comprehensive identification of genes involved in the growth and immunogenicity of vaccinia virus, LC16m8

全面鉴定痘苗病毒LC16m8生长和免疫原性相关基因

基本信息

批准号：
22K08595
负责人：
吉河智城
金额：
$ 2.75万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08595/
关键词：
組換え法ワクチンウイルスワクシニア LC16ｍ8

项目摘要

痘そうワクチン株LC16m8の全ゲノムを保持するbacterial artificial chromosome (BAC)、pLC16m8-BACに導入するトランスポゾンを設計し、その評価を行った。トランスポゾンは大腸菌で薬剤選択を行う為のアンピシリン耐性遺伝子と、トランスポゾンが挿入された際に大腸菌のコロニーを蛍光で選択するための蛍光タンパク質遺伝子であるmScarlet遺伝子にて構成されるものとし、これらの遺伝子を保持するプラスミド、pAmp-9mScarletの作製に成功した。当初mScarlet遺伝子はワクシニアウイルス特異的なプロモーターで発現することを計画していたが、この場合トランスポゾンの挿入によって、このプロモーターの下流で予期しない遺伝子発現が生じる可能性があった。そこでワクシニアウイルス特異的なプロモーターによる制御では無く、大腸菌のプロモーターによる制御に変更した。作製したpAmp-9mScarletからトランスポゾンを作製する前に、これら二つの遺伝子を用いたBACプラスミドの組換え効率を検討するべく、pAmp-9mScarletを一般的なBACプラスミドの組換えに使用したところ、組換えが生じた大腸菌は想定通りにアンピシリン耐性を獲得し、更にLEDトランスイルミネーターを用いることで赤色の蛍光を発することが確認された。以上よりpAmp-9mScarletから作製するトランスポゾンは、トランスポゾンが導入された大腸菌の選択に於いても威力を発揮することが期待できる結果となった。

设计并评估了转座子，用于引入痘痘菌株LC16M8的整个基因组，一种人造染色体（BAC），PLC16M8-BAC。转座子由用于在大肠杆菌中的药物选择的氨苄青霉素抗性基因和Mscarlet基因，Mscarlet基因是一种荧光蛋白基因，用于在插入转座子时选择大肠杆菌荧光。质粒成功产生了质粒，PAMP-9MScarlet。最初，计划在谷谷病毒特异性启动子上表达mscarlet基因，但是在这种情况下，转座子的插入可能会导致启动子下游的意外基因表达。因此，对照将其更改为大肠杆菌启动子，而不是通过离甲酸病毒特异性启动子更改为。在从产生的PAMP-9MScarlet产生转座子之前，使用PAMP-9MScarlet重组一般的BAC质粒，以使用这两个基因研究BAC质粒的重组效率。已经证实，经历了重组的大肠杆菌的重组，如预期的那样达到了氨苄青霉素的耐药性，而LED透明会发出了红色荧光。从以上，预计从PAMP-9MScarlet产生的转座子也将有效，即使选择了转座子的大肠杆菌。