膵癌進展の病態伝播を担う細胞外小胞の機能解明~臨床応用を目指して~

阐明在胰腺癌病理增殖中发挥作用的细胞外囊泡的功能～以临床应用为目标～

• 批准号: 22K07982
• 负责人: 坪井 順哉
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07982/
• 关键词: 細胞外小胞; 膵がん; 膵癌

膵がんのEUS-FNA検体、36検体から細胞外小胞（EV)を回収し、calceinで染色し、flow cytometryにてintact EV数を測定した。採取したEVはその後カラムを用いて精製し、サイズの測定も行った。また、コントロールとして自己免疫性膵炎(AIP)6例の残余検体からEVを回収した。ステージⅠ～Ⅳ、AIPの比較を行ったところ、EV数の平均はステージⅠ：13578 particles/ul、ステージⅡ：11227 particles/ul、ステージⅢ：14708 particles/ul、ステージⅣ：9176 particles/ul、AIP：10246 particles/ulであり、ステージⅠ、Ⅱに比べⅢは高くなるが、ステージⅣでは減少を認めた。EVの平均サイズについてはステージⅠ：275nm、ステージⅡ：288nm、ステージⅢ：307nm、ステージⅣ：277nm、AIP：255nmであり、ステージⅢまでは上昇し、ステージⅣで低下を認めた。今後さらに検体を追加して解析する予定である。当初は、膵がん患者から得られたEVをヒトのがん関連線維芽細胞（CAF)などに添加し、細胞の活性化を細胞形態や遺伝子発現の変化により検討する予定であったが、EUS-FNA残余検体から得られるEV数が極めて少なかったため、ヒト膵がん細胞株を用いてEVを回収する方針とした。ヒト膵がん細胞株はPanc-1、MIA-Paca-2を使用した。膵がん細胞増殖に関わるサイトカインとして既知のIL-1β、IL-6、TNF-αを用いて膵がん細胞株の刺激を行ったところ、いずれのサイトカインにおいてもEVの放出を認めた。このことは、膵癌の病態進展に寄与するサイトカインによりEVが放出されることを示唆している。現在、EVを放出するサイトカインの至適濃度を調整中である。

从 36 个胰腺癌 EUS-FNA 标本中收集细胞外囊泡 (EV)，用钙黄绿素染色，并使用流式细胞术测量完整 EV 的数量。然后使用柱纯化收集的 EV，并测量它们的大小。此外，作为对照，从 6 例自身免疫性胰腺炎（AIP）的残留标本中回收了 EV。比较第一阶段、第四阶段和 AIP 时，EV 的平均数量为第一阶段：13578 个颗粒/ul，第二阶段：11227 个颗粒/ul，第三阶段：14708 个颗粒/ul，第四阶段：9176 个颗粒/ul，AIP：10246颗粒/ul，第 III 阶段高于第 I 和 II 阶段，但在第 IV 阶段观察到下降。 EV 的平均尺寸为 I 期 275nm、II 期 288nm、III 期 307nm、IV 期 277nm、AIP 255nm，到 III 期增大，到 IV 期减小。我们计划在未来添加更多样本并进行分析。最初的计划是将胰腺癌患者获得的 EV 添加到人类癌症相关成纤维细胞 (CAF) 中，并根据细胞形态和基因表达的变化检查细胞激活情况，因为从 EUS-FNA 残留样本中获得的 EV 数量非常多。小，我们决定使用人类胰腺癌细胞系收集 EV。使用人胰腺癌细胞系Panc-1和MIA-Paca-2。当使用IL-1β、IL-6和TNF-α（已知的参与胰腺癌细胞增殖的细胞因子）刺激胰腺癌细胞系时，观察到每种细胞因子的EV释放。这表明 EV 是由促进胰腺癌病理进展的细胞因子释放的。我们目前正在调整释放 EV 的细胞因子的最佳浓度。