免疫ブースト効果によるがんの放射線治療効果向上の試み

尝试通过免疫增强作用提高癌症放射治疗的效果

• 批准号: 22K07767
• 负责人: 渡部 明彦
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07767/
• 关键词: バキュロウイルス; ネオ抗原; 放射線; がん免疫; 放射線治療; 免疫誘導; ブースター; 組換えウイルス

組換えバキュロウイルスの入手に関しては、共同研究先の金沢大学のワクチン応用免疫研究室から分与して頂く予定であったが、保存組換え体が失活してしまったため分与が難しくなった。そこで、外注することとし、組換えバキュロウイルスの設計を行い、現在、組換えウイルス構築について打ち合わせ中である。研究の中心となる組換えウイルスの利用がままならないため、大きな実績はまだないが、いくつかの進捗について言及したい。まず組み換えバキュロの設計であるが、まだ最終決定ではないが、EF1プロモーター下にルシフェラーゼ遺伝子を配置して、下流側にSV40のPolyA部位を導入した遺伝子カセットをゲノム中に導入した組換えバキュロウイルスを構築してもらおうと考えている。現在、打ち合わせ中で、構造が決定したらすぐに構築を開始して貰う予定である。Luc発現細胞を構築、単離をおこなった。ハイグロマイシン耐性遺伝子を発現するルシフェラーゼ発現ベクターを購入し、マウスのがん細胞であるRenca細胞と4T1細胞に遺伝子導入をおこなった。Geneticin存在下で培養し、それぞれの細胞株でコロニーを形成する5クロンを単離増殖した後に、ルシフェラーゼアッセイおよびウエスタンブロッティングで発現量を評価した。Renca細胞では、特に多く発現するクロン（他のものと比較して数百倍の発現量のもの）を取得した。また4T1細胞では取得した10クロンで発現量に大きな差はなかった。それぞれの取得クロンで増殖を比較したが、大きな違いはなかった。実験では今回得られた細胞を利用する予定である。

关于重组杆菌病毒的可用性，计划从卡纳泽大学的疫苗应用免疫学实验室中分发，但保守的重组因素被灭活，因此很难分发它们。因此，我们决定将公司外包，设计重组杆状病毒，目前正在讨论重组病毒的构建。目前尚无重大记录，因为重组病毒是研究的中心，但我想提到一些进展。首先，重组Baculo的设计还不是最终决定，但是我们计划构建一个重组的杆状病毒，其中将荧光素酶基因放置在EF1启动子下方，并在其中引入了SV40的Polya Sv40的基因盒，并将其引入下游。目前，我们计划在确定结构后立即开始建设。构建并分离出表达Luc的细胞。我们购买了一种表达综合霉素耐药基因并将基因转染到小鼠癌细胞renca和4T1细胞中的荧光素酶表达载体。通过荧光素酶测定法和蛋白质印迹在遗传素存在并在每个细胞系中定居5 cr培养后评估表达水平。在Renca细胞中，获得了特别表达的CRON（表达水平比其他细胞高几百倍）。此外，在4T1细胞中获得的10个CRON的表达水平没有显着差异。比较了每个获得的Cron的增殖，但没有显着差异。这次获得的细胞将用于实验。