ヒト口腔内常在菌が関与する血小板を介した疾患発症機序の解明

阐明涉及人类口腔细菌的血小板介导的疾病发病机制

基本信息

批准号：
22K07489
负责人：
森本徳仁
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kochi Gakuen University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2027-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

口腔内には好気および嫌気環境下のもと多種にわたる微生物が生息しているが、一部の常在菌においては、生活習慣病、自己免疫疾患および大腸がん等の全身疾患の発症や進行リスクを高めることが明らかになってきている。また、冠動脈疾患では、主に連鎖球菌の有する血小板凝集能の関与も示唆されているが、宿主に常在している細菌群が生体にどのような機序により全身疾患を発症するかについては不明な点が多い。本研究では、自己の口腔内常在菌に対する宿主の免疫反応および血小板活性化がこれらの全身性疾患発症に関与していると仮定し解析を行なってきた。これまでに、成人5名の口腔内試料より常在菌を分離し、採血により得た血清および血小板多血漿を用いて解析を行なった。1人当たり36～50菌株の常在菌が分離された。これらの常在菌に対する抗体についてELISA法およびWestern Blot（以下、WB）による解析を行った。ELISA法は各菌蛋白を固相した自家製のELISA（以下、Ih-ELISA）プレートを作成し抗体スクリーニング法を確立した。Ih-ELISA法においてO.D.値が高値を示した常在菌は被験者1人当たり7～14菌種であった。これらの抗体プロファイルをWBにより解析した結果、低ー高分子の様々な常在菌抗原に反応する抗体を認めた。特に、Haemophilus属において低分子蛋白に対する抗体が検出された。また、同一菌種に対して宿主により反応性が大きく異なる菌種の存在としてもHaemophilus属が確認された。分離された菌種による血小板活性化の一つとして血小板凝集能を観察した結果、分離された菌のうちStreptococcus anginosusおよびFusobacterium nucleatumにおいて強い血小板凝集が観察された。

尽管在有氧和厌氧环境下，在口腔中生活了多种微生物，但已经表明，某些正常细菌会增加患有与生活方式相关疾病，自身免疫性疾病和结肠癌等全身性疾病的风险。在冠状动脉疾病中，还有人提出，链球菌的血小板聚集能力主要参与，但目前尚不清楚宿主居住的细菌将在生物体中形成全身性疾病。在这项研究中，我们进行了分析，假设宿主对自体驻留细菌和血小板激活的免疫反应与这些全身性疾病的发展有关。迄今为止，已经从五个成年人的口腔内样品中分离出正常细菌，并使用血清和血小板的血浆通过血液收集获得了分析。每人隔离36-50种居民细菌。通过ELISA方法和Western印迹分析了针对这些驻留细菌的抗体（以下称为WB）。 ELISA方法用于制备自制ELISA（以下称为IH-ELISA），该板含有固相的各个细菌蛋白，并建立了一种抗体筛选方法。 IH-Elisa方法具有高O.D.值，每个受试者7至14种。使用WB分析了这些抗体谱，并对各种低聚合物驻留抗原反应。特别是，在嗜血杆菌属中检测到针对小分子蛋白的抗体。此外，还证实了嗜血杆菌属，这是细菌物种的存在，这些细菌对同一物种的反应性明显不同，具体取决于宿主。由于观察到血小板聚集能力是分离细菌的血小板激活之一，因此在分离的细菌中观察到在苯甲酸链球菌和核细菌中观察到强的血小板聚集。