Functional analysis of miRNA in anti-cancer drug-resistance of hepatocellular carcinoma

miRNA在肝细胞癌抗癌耐药中的功能分析

• 批准号: 22K07473
• 负责人: 藤田 浩二
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07473/
• 关键词: プロテオーム解析; Microarray; 耐性; 肝細胞癌; 薬剤耐性; miRNA

1) カボザンチニブがレンバチニブ耐性肝がん細胞に対して有効であることを動物実験で検証した．レンバチニブ耐性肝がん細胞株をマウスの皮下に移植し，カボザンチニブをマウスに経口投与した．その結果，カボザンチニブを投与した群においては，対照群に比べて，皮下に移植したレンバチニブ耐性肝がん細胞の成長が抑制された．2) 次に，カボザンチニブの薬効に関連するタンパク質及びmicroRNAの同定を試みた．マウスの皮下から腫瘍を取り出して，腫瘍に含まれるたんぱく質の発現をプロテオーム解析にて網羅的に解析した．また，タンパク質の発現を制御する分子であるmicroRNAについても，microarrayを用いて網羅的に解析した．その結果，カボザンチニブ投与群と対照群の比較において，統計学的に有意に発現が異なるタンパク質48分子とmicroRNA 10分子をそれぞれ同定した．同定されたタンパク質の発現が，同じく同定されたmicroRNAによって制御されている可能性について，microRNAのデータベース(miRDB)を用いて検索した．その結果，同定されたmicroRNAとタンパク質の間には，直接的な反応(microRNAがmessanger RNAの3'末に結合すること)は無いものと予測された．3) カボザンチニブの薬効に関連するmicroRNAについて，腫瘍の増殖を抑制する作用を検証した．同定されたmicroRNAをレンバチニブ耐性肝がん細胞に取り込ませた(Lipofectamineによるtransfection)．また逆に，同定されたmicroRNAの阻害物質 (miRNA inhibitor)を同様にレンバチニブ耐性肝がん細胞に取り込ませた．その結果，レンバチニブ耐性肝がん細胞において発現の増加していたmicroRNAは，腫瘍の増殖を抑制しないことが分かった．

1）我们测试了动物实验，以验证Cabozantinib是否有效地针对抗lenvatinib的抗肝癌细胞。皮下植入lenvatinib抗肝癌细胞系，并向小鼠口服Cabozantinib。结果，与对照组相比，接受卡博替尼的组抑制了皮下植入的lenvatinib抗肝癌细胞的生长。 2）接下来，我们试图鉴定与卡博替尼药用特性有关的蛋白质和microRNA。从皮下小鼠中去除肿瘤，并通过蛋白质组分析对肿瘤中蛋白的表达进行全面分析。此外，还使用微阵列对调节蛋白质表达的分子MicroRNA进行了全面分析。结果，在比较Cabozantinib处理的组和对照组时，鉴定出48个蛋白质分子和10个microRNA分子在统计学上的表达显着差异。我们使用microRNA数据库（MIRDB）进行了搜索，以使已鉴定蛋白的表达受到相同的鉴定microRNA调节。结果，可以预测在已鉴定的microRNA和蛋白质之间没有直接反应（microRNA与Messanger RNA的3'末端结合）。 3）我们研究了与Cabozantinib在抑制肿瘤生长中的药物功效相关的microRNA的作用。鉴定出的microRNA被掺入lenvatinib耐药性肝癌细胞中（通过脂肪系转染）。相反，已鉴定的microRNA抑制剂（miRNA抑制剂）类似地掺入了耐兰伐他尼的肝癌细胞中。结果表明，在耐氟尼尼抗肝癌细胞中表达增加的microRNA并未抑制肿瘤的生长。