小血管の老化から解明するトランスサイレチンアミロイドーシスの病態

小血管老化阐明转甲状腺素蛋白淀粉样变性的病理学

• 批准号: 22K07400
• 负责人: 三隅 洋平
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07400/
• 关键词: トランスサイレチン; 血管老化; アミロイドーシス

ヒト変異型トランスサイレチンを産生するトランスジェニックマウスおよびコントロールマウスに対してトランスサイレチン型家族性アミロイドポリニューロパチー患者の各種臓器剖検組織サンプルより抽出したアミロイド線維を皮下投与し、皮下組織血管へのトランスサイレチンアミロイド線維の沈着量と血管構造変化（内膜の肥厚、内弾性板断裂、血管平滑筋細胞の減少）との関連、および細胞老化との関連性について経時的に解析した。トランスサイレチン型家族性アミロイドポリニューロパチー患者の各種臓器の血管組織をレーザーマイクロダイセクション法により切り出し、LC/MS/MS解析により、アミロイド沈着に関連する血管障害因子の探索を行い、アミロイド線維が沈着した血管に共通して認められる蛋白質プロファイルを同定した。老化誘導細胞／非老化誘導細胞に対して全長トランスサイレチンおよび断片化トランスサイレチンよりin vitroで作成したアミロイド線維を加え、経時的な細胞へのトランスサイレチン凝集体およびアミロイド沈着量を、コンゴ・レッド染色、共焦点顕微鏡、透過型電子顕微鏡により評価を行い、また細胞老化による細胞形態の変化についての解析を行った。トランスサイレチン型家族性アミロイドポリニューロパチーおよび老人性全身性アミロイドーシス患者より、同意を得て血清、血漿および脳脊髄液サンプルを収集し、血管障害のバイオマーカーの探索を行った。トランスサイレチン型家族性アミロイドポリニューロパチー患者における血管機能障害と関連した各種生理機能検査のデータ収集・解析を行った。

将从转甲状腺素蛋白型家族性淀粉样多发性神经病患者的各器官尸检组织样本中提取的淀粉样纤维皮下注射给产生人突变转甲状腺素蛋白的转基因小鼠和对照小鼠，并分析转甲状腺素蛋白诱导进入皮下组织血管的量之间的关系。随着时间的推移，甲状腺素淀粉样蛋白纤维沉积和血管结构变化（内膜增厚、内弹性层撕裂和血管平滑肌细胞减少）和细胞老化。采用激光显微切割技术切取转甲状腺素蛋白型家族性淀粉样多发性神经病患者各器官的血管组织，进行LC/MS/MS分析，寻找与淀粉样蛋白沉积相关的血管紊乱因素，并研究淀粉样蛋白原纤维的沉积。我们确定了血管中常见的蛋白质谱。将全长转甲状腺素蛋白和片段化转甲状腺素蛋白在体外制备的淀粉样原纤维添加到衰老诱导细胞/非衰老诱导细胞中，并在刚果测量细胞中转甲状腺素蛋白聚集体和淀粉样蛋白沉积物随时间的变化量。 ・进行评价使用红染色、共聚焦显微镜和透射电子显微镜，分析了细胞老化引起的细胞形态变化。经转甲状腺素蛋白型家族性淀粉样多发性神经病和老年系统性淀粉样变性患者同意，收集血清、血浆和脑脊液样本，以寻找血管疾病的生物标志物。我们收集并分析了转甲状腺素蛋白型家族性淀粉样多发性神经病患者与血管功能障碍相关的各种生理功能测试的数据。