HIV-1感染におけるDNA脱アミノ化酵素群の真の役割の解明

阐明 DNA 脱氨酶基团在 HIV-1 感染中的真正作用

基本信息

批准号：
22K07103
负责人：
池田輝政
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

ウイルスは宿主細胞の様々なタンパク質を利用することにより自身を複製するが、宿主細胞も様々な防御機構によりウイルス感染を防御しようとする。ウイルス感染抑制に関わる重要なタンパク質の１つがAPOBEC3 (A3) ファミリータンパク質である。A3ファミリータンパク質はヒトでは7つのタンパク質で構成されるが、それぞれの標的や機能が重複しており、A3ファミリータンパク質全体のウイルス感染における役割は完全に明らかにされていない。そこで本研究では、A3ファミリータンパク質の真の生理的役割を明らかにする目的の一端として、本研究室で樹立した全A3遺伝子欠損THP-1細胞を用いて、HIV-1感染におけるA3ファミリータンパク質の真の役割を明らかにすることを目的とした。この目的を達成するために、樹立した全A3遺伝子欠損株において、VSV-Gシュードタイプウイルスを用いた、シングルラウンドのHIV-1感染実験を行った。その結果、樹立した全A3遺伝子欠損株では、Vif欠損HIV-1は、野生株と同等の感染性になることが明らかとなった。また、全A3遺伝子欠損細胞から産生されたVif欠損HIV-1プロウイルス上のG→A変異数を検証したところ、A3タンパク質由来のG→A変異は観察されなかった。また、HIV-1後期逆転写産物の量を測定したところ、全A3遺伝子欠損細胞から産生されたVif欠損HIV-1と野生株の逆転写産物の量はほとんど同じであった。したがってこれらの結果から、THP-1細胞においてHIV-1複製に必要なVifの標的タンパク質は、A3ファミリータンパク質であることが明らかとなった。

病毒通过利用宿主细胞中的各种蛋白质进行自我复制，宿主细胞也试图通过各种防御机制来防止病毒感染。 APOBEC3 (A3) 家族蛋白是参与抑制病毒感染的重要蛋白之一。 A3家族蛋白在人体中由7种蛋白组成，但每种蛋白都有重叠的靶点和功能，所有A3家族蛋白在病毒感染中的作用尚未完全阐明。因此，本研究中，为了阐明A3家族蛋白的真正生理作用，我们利用本实验室建立的全A3基因缺陷的THP-1细胞来研究A3家族蛋白在HIV-1感染中的作用的目的。是为了澄清真正的作用。为了实现这一目标，我们在已建立的全A3基因缺失毒株中使用VSV-G假型病毒进行了单轮HIV-1感染实验。结果表明，在建立的全A3基因缺失株中，Vif缺陷型HIV-1具有与野生型株相同的感染力。此外，当我们验证由缺乏所有 A3 基因的细胞产生的 Vif 缺陷型 HIV-1 原病毒上 G→A 突变的数量时，没有观察到源自 A3 蛋白的 G→A 突变。此外，当测量HIV-1的晚期逆转录产物量时，发现所有A3基因缺陷细胞和野生型株产生的Vif缺陷型HIV-1的逆转录产物量几乎是相同的。相同的。因此，这些结果表明，THP-1细胞中HIV-1复制所需的Vif的靶蛋白是A3家族蛋白。