CRISPR screen to identify novel molecular mechanisms of HIV-1 latency

CRISPR 筛选鉴定 HIV-1 潜伏期的新分子机制

• 批准号: 22K07085
• 负责人: 白川 康太郎
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07085/
• 关键词: HIV; 潜伏感染; shock and kill; 潜伏感染再活性化薬; HIV感染症根治療法; HIV感染症; CRISPRスクリーン

二重蛍光レポーターHIVGKOを感染させたJurkat T細胞からmKO陽性の潜伏感染細胞モデル(JGL)を用いてCRISPRスクリーニングを行い、ノックアウトによりHIV転写の活性化を示す４遺伝子を同定した。JGL細胞およびGFPレポーターをもつJ-Lat細胞株6.3, 8.4, 11.1および5A8をもちいてこれらの遺伝子のノックアウトによりHIV転写が活性化することを確認した。この際、ウエスタンブロットでGagの発現を確認できた。さらにTet-on shRNAを用いてこれらの遺伝子のノックダウンが同様にHIV転写を活性化することを示した。また、これらの遺伝子に関連する化合物を培地に添加することでJGLおよびJ-LatのHIV転写の活性化が誘導され、新たなメカニズムの潜伏感染再活性化薬として作用することを発見し研究を継続している。

使用带有潜在感染的细胞模型（JGL）筛选了带有双荧光报告基因HIVGKO的Jurkat T细胞，并通过敲除鉴定出四个显示HIV转录激活的基因。我们证实，这些基因的敲除通过使用JGL细胞和J-LAT细胞系6.3、8.4、11.1和5A8激活HIV转录，后者携带JGL细胞和GFP报告基因。目前，Western印迹证实了插科打术的表达。此外，还显示使用Tet-On ShRNA敲低这些基因可以激活HIV转录。此外，正在继续进行研究，因为发现将与这些基因相关的化合物添加到培养基中会诱导JGL和J-LAT的HIV转录激活，这是重新激活潜在感染的新机制。