サルマラリア原虫接着分子とヒト受容体の結合解析

猴疟原虫粘附分子与人类受体的结合分析

基本信息

批准号：
22K07043
负责人：
坂口美亜子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究の目的は、二日熱マラリアの重篤化に関与する Plasmodium knowlesi 寄生赤血球の接着機構を解明するため、P. knowlesi 接着分子が結合するヒト血管内皮細胞の受容体を同定し、相互作用を解析することである。まず最初に、すでに同定している P. knowlesi 接着分子の7つのシステインリッチドメイン（C1-C7）のうち、どの部位がヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）に結合するのかを評価するため、細胞外領域の全長及び各ドメインを含む小さな領域について GST タグを付与した組換えタンパク質をコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系により作製したところ、想定していたよりも組換えタンパク質の収率がよくなく、またあるドメインで高い結合性が示されたものの新たに作製した組換えタンパク質において再現性が得られなかったため、本方法での結合解析は断念することになった。その代わりに、接着分子のドメインの細胞外領域のうちいくつかのドメインを除いた短い接着分子（C1-C4あるいはC4-C7）を発現する組換え P. knowlesi 原虫を作製し、どのドメインが接着に関与するのかについて HUVEC への結合性を評価することにした。また、HUVEC におけるヒト受容体の同定の際の参考情報とするため、 P. knowlesi 寄生赤血球の接着においてヒト受容体にはタンパク質成分が含まれるのかを確認する目的で、まず培養した HUVEC に対してかなり低濃度のプロテアーゼ処理を行い接着アッセイを試みた。しかし細胞の変形や部分的なプレート上の接着の阻害などが避けられず、ヒト受容体のみをうまく除去することができなかった。

本研究的目的是鉴定诺氏疟原虫粘附分子与人体血管内皮细胞上的受体结合并相互作用，以阐明诺氏疟原虫寄生红细胞的粘附机制，该机制与诺氏疟原虫的严重程度有关。是间日疟。首先，为了评估先前确定的诺氏疟原虫粘附分子的七个富含半胱氨酸的结构域 (C1-C7) 中的哪一个与人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 结合，我们对该区域的整个长度和小区域进行 GST。包括每个域的区域当使用小麦胚芽无细胞蛋白质合成系统生产带标签的重组蛋白时，重组蛋白的产量没有预期的那么好，并且虽然某些结构域表现出高结合，但很难产生新的蛋白质。获得的重组蛋白无法获得重现性，我们决定放弃使用这种方法进行结合分析。相反，我们创建了表达短粘附分子（C1-C4 或 C4-C7）的重组诺氏疟原虫，并去除了粘附分子结构域的一些胞外区域，并确定了哪些结构域是粘附分子。我们决定评估与粘附分子的结合。 HUVEC确定其是否参与以下过程。此外，为了在鉴定HUVEC中的人类受体时提供参考信息，我们首先测试了培养的HUVEC，以确认诺氏疟原虫寄生的红细胞的粘附中是否含有人类受体的蛋白质成分，并使用相当低的粘附力进行了测定。蛋白酶处理浓度。然而，细胞变形和平板上粘附的部分抑制是不可避免的，不可能仅成功去除人类受体。

项目成果

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专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Identification of surfactin as an anti-severe fever with thrombocytopenia syndrome virus multi-target compound extracted from the culture broth of marine microbes

DOI：
10.3389/fviro.2022.1064265
发表时间：
2023-03
期刊：
影响因子：
0
作者：
Shuzo Urata;Jun Takouda;Yoshihiro Watanabe;M. Sakaguchi;Yasuteru Sakurai;Yuki Inahashi;M. Iwatsuki;J. Yasuda;Yoshimasa Tanaka;K. Takeda
通讯作者：
Shuzo Urata;Jun Takouda;Yoshihiro Watanabe;M. Sakaguchi;Yasuteru Sakurai;Yuki Inahashi;M. Iwatsuki;J. Yasuda;Yoshimasa Tanaka;K. Takeda

SICA-mediated cytoadhesion of Plasmodium knowlesi-infected red blood cells to human umbilical vein endothelial cells.

DOI：
10.1038/s41598-022-19199-0
发表时间：
2022-09-02
期刊：
SCIENTIFIC REPORTS
影响因子：
4.6
作者：
Chuang, Huai;Sakaguchi, Miako;Lucky, Amuza Byaruhanga;Yamagishi, Junya;Katakai, Yuko;Kawai, Satoru;Kaneko, Osamu
通讯作者：
Kaneko, Osamu