Cancer progression-related translocation of gap junction protein into the Golgi apparatus – Elucidation of its molecular mechanism

癌症进展相关的间隙连接蛋白易位至高尔基体

基本信息

批准号：
22K06996
负责人：
大森泰文
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06996/
关键词：
ギャップ結合コネキシンがん幹細胞細胞内輸送ストレス応答

项目摘要

令和４年度は、以下の点について研究を進めた。Rab5やRab9のGEFやGAPの発現量とCxの局在の関連を探った・・・Rab5はコネキシン(Cx)をはじめとする膜タンパクのエンドサイトーシスに関与しており、Rab9はエンドソームからトランスゴルジネットワークへの逆行輸送に関与しているが、これらのRabファミリータンパクの機能変化は、発現量ではなく活性の変化によるものである。そこで、これらのRabタンパクを活性化するGEF (guanine-nucleotide exchange factor)や不活化するGAP (GTPase-activating protein)の発現量を、様々な細胞を用いてウェスタンブロットで検討した。材料としては、肝細胞癌や頭頸部扁平上皮癌、乳癌、皮膚扁平上皮癌などの腫瘍由来でCxが細胞膜に局在する細胞やゴルジ体に局在する細胞など、局在の異なるCxを発現している細胞シリーズを用いることとした。Rab5、Rab9とも複数のGEFやGAPが存在するので、これら制御タンパクの発現量とCxの細胞内局在および局在量を対比させたところ、Cxが膜に局在する細胞では、Rab5の主たるGAPであるRabGAP-5の発現が高い傾向があり、Cxが主にゴルジ体に局在する細胞では、Rab5のGEFであるRin3とRab9のGEFであるDENND2が有意に増加していることが確認された。

2020年度，我们进行了以下几点研究。我们研究了 Rab5 和 Rab9 的 GEF 和 GAP 表达水平与 Cx 定位之间的关系...Rab5 参与包括连接蛋白 (Cx) 在内的膜蛋白的内吞作用，而 Rab9 是从内体转位的，尽管参与逆行运输。对于高尔基体网络来说，这些 Rab 家族蛋白的功能变化是由于活性的变化而不是表达水平的变化。因此，我们利用不同细胞的蛋白质印迹法检测了激活这些 Rab 蛋白的 GEF（鸟嘌呤核苷酸交换因子）和失活这些蛋白的 GAP（GTP 酶激活蛋白）的表达水平。材料包括源自肝细胞癌、头颈鳞状细胞癌、乳腺癌和皮肤鳞状细胞癌等肿瘤的细胞，这些细胞在不同部位表达Cx，例如Cx位于细胞膜的细胞和位于高尔基体的细胞我们决定使用来自的细胞系列。 Rab5和Rab9都具有多个GEF和GAP，因此当我们将这些调节蛋白的表达水平与Cx的细胞内定位和定位量进行比较时，我们发现在Cx定位于膜的细胞中，Rab5是主要的GAP已证实，Rin3（Rab5的GEF）和DENND2（Rab9的GEF）在特定RabGAP-5的表达趋于高且Cx主要定位于高尔基体的细胞中显着增加。