癌細胞と間質細胞との直接接触による細胞間相互作用を介した食道癌の進展機構の解析

通过癌细胞与基质细胞直接接触引起的细胞间相互作用分析食管癌进展的机制

基本信息

批准号：
22K06978
负责人：
狛雄一朗
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06978/
关键词：
食道癌癌微小環境線維芽細胞マクロファージ癌間質相互作用

项目摘要

食道扁平上皮癌(ESCC)細胞・マクロファージ・線維芽細胞の間の「直接接触による細胞間相互作用」を媒介する分子の役割を各種培養細胞や病理組織標本を用いて解析した。研究①：ESCC細胞と線維芽細胞との直接共培養系を確立した。具体的には、ESCC細胞株としてTE-9・TE-10・TE-15、線維芽細胞としてヒト骨髄由来間葉系幹細胞（MSC）を用いた。ESCC細胞株とMSCを混合して直接共培養し、４日後に細胞を剥がし、癌細胞特異抗原EpCAMに対する抗体で標識された磁気粒子による自動磁気細胞分離装置を用いた細胞分離によって、EpCAM陽性細胞（すなわちESCC細胞株）とEpCAM陰性細胞（すなわちMSC）に分画した。比較対照として単独培養したESCC細胞株あるいはMSCを用いた。直接共培養後のMSCはCAFマーカーのFAPを高発現し、CAF様細胞と定義した。直接共培養後のESCC細胞株は単独培養後のESCC細胞株と比べて増殖能や運動能が亢進し、各種シグナル伝達分子が活性化した。「単独培養後のESCC細胞株」と「直接共培養後のESCC細胞株」、あるいは「単独培養後のMSC」と「直接共培養後のMSC（CAF様細胞）」との間でcDNAマイクロアレイ解析を施行した。研究②：既に確立していたESCC細胞株とマクロファージとの直接共培養系を解析した。マクロファージと直接共培養後のESCC細胞株においてInterleukin 7 receptor (IL7R)が発現亢進した。IL7を添加したESCC細胞株はIL7Rを介して運動能や浸潤能が亢進した。IL7Rを高発現させたESCC細胞株では増殖能が亢進した。IL7Rを高発現するESCC症例は予後不良な傾向を示した。以上からマクロファージとの相互作用によって癌細胞において発現亢進するIL7RはESCCの進展に寄与することを明らかにした。

我们使用各种培养细胞和病理组织标本分析了介导食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞、巨噬细胞和成纤维细胞之间“直接细胞间相互作用”的分子的作用。研究1：我们建立了ESCC细胞和成纤维细胞的直接共培养体系。具体而言，使用TE-9、TE-10和TE-15作为ESCC细胞系，使用人骨髓来源的间充质干细胞(MSC)作为成纤维细胞。将 ESCC 细胞系和 MSC 直接混合并共培养，4 天后分离细胞，并使用自动磁性细胞分离器使用标记有针对癌细胞特异性抗原 EpCAM 的抗体的磁性颗粒来分离 EpCAM 阳性细胞。（即 ESCC 细胞系）和 EpCAM 阴性细胞（即 MSC）。使用单独培养的 ESCC 细胞系或 MSC 作为对照。直接共培养后的MSC高表达CAF标志物FAP，被定义为CAF样细胞。直接共培养后的ESCC细胞系与单独培养后的ESCC细胞系相比，增殖和运动能力增强，并且多种信号转导分子被激活。在“单一培养后的ESCC细胞系”和“直接共培养后的ESCC细胞系”或“单一培养后的MSC”和“直接共培养后的MSC（CAF样细胞）”之间进行cDNA微阵列分析。研究2：我们分析了已经建立的ESCC细胞系和巨噬细胞的直接共培养体系。与巨噬细胞直接共培养后，ESCC 细胞系中白细胞介素 7 受体 (IL7R) 的表达增加。补充IL7的ESCC细胞系的运动和侵袭能力通过IL7R增强。高表达IL7R的ESCC细胞系增殖能力增强。 IL7R高表达的ESCC病例往往预后较差。这些结果表明，IL7R 通过与巨噬细胞相互作用在癌细胞中表达上调，从而促进 ESCC 的进展。