免疫寛容プラットフォームとしてのラット胸腺髄質の上皮細胞欠損領域の解析

大鼠胸腺髓质上皮细胞缺陷区作为免疫耐受平台的分析

• 批准号: 22K06797
• 负责人: 沢登 祥史
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Dokkyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06797/
• 关键词: 胸腺; 樹状細胞; 線維芽細胞; トランスクリプトーム; 免疫寛容; T細胞産生

以下の小項目番号は申請書の研究実施計画に基づく。「I-A: mEFAの組織学的解析」および、「II-A: mEFA細胞群のプロテオミクス解析」に記載されたmEFAに存在する細胞の単離と同定を行った。免疫組織化学解析からmEFAに局在すると予想されたCD103陰性新規DC候補細胞を単離しmRNAを抽出し、マイクロアレイ解析した。対照として、既知のcDCサブセットおよび脾臓のCD103陰性新規DC候補細胞を解析した。その結果、胸腺のCD103陰性新規DC候補細胞に特異的に発現する遺伝子として、Mmp14やApoc1などが見出された。この内Mmp14に対する抗体を購入しフローサイトメトリーを行い、胸腺のCD103陰性新規DC候補細胞に特異的に発現することを見出した。しかし、免疫染色ではMMP14発現は必ずしもmEFAに限定されず、さらなる細胞の探索が必要であることが示唆された。「II-B: 線維芽細胞のトランスクリプトーム解析」を行うために、線維芽細胞の単離を試みた。しかし、市販のPDGFRb抗体はいずれも免疫組織化学染色では良好な染色を呈するが、フローサイトメトリー上では染色できないために、単離は難しいという結論に達した。現在、CD45陰性ストローマ細胞全体をソートし、シングルセル解析することにより線維芽細胞を含む胸腺ストローマ細胞全体のトランスクリプトーム情報を得ることを目指し、実験が進行中である。「I-B: 質量顕微鏡によるmEFAの低分子マッピング」を進めるため、胸腺組織を質量顕微鏡で解析した。複数のマトリクスを用いて測定を繰り返し、髄質に存在する低分子化合物の候補としてホスファチジルセリン(36:1)およびオクソトリコシル酸などを同定した。また、以上の結果の一部を第51回2本免疫学会学術集会（2022年12月、熊本）にて報告した。

以下子项目数基于申请表的研究实施计划。在“ I-A：MEFA的组织学分析”和“ II-A：MEFA细胞组的蛋白质组学分析”中描述的MEFA中存在的细胞被分离和鉴定。通过免疫组织化学分析，提取了新的CD103阴性直流候选细胞，预计将通过免疫组织化学分析定位于MEFA，提取mRNA，并进行了微阵列分析。作为对照，分析了来自脾脏的已知CDC子集和新型CD103阴性DC候选细胞。结果，发现诸如MMP14和APOC1之类的基因在胸腺中的新型CD103阴性直流候选细胞中被特异性表达。在这些针对MMP14的抗体中，购买了流式细胞仪，发现它们是在胸腺中新型CD103阴性直流候选细胞中特异性表达的。但是，免疫染色表明MMP14表达不一定限制在MEFA中，需要进一步的细胞搜索。为了执行“ II-B：成纤维细胞的转录组分析”，我们试图分离成纤维细胞。但是，我们得出的结论是，尽管所有市售的PDGFRB抗体在免疫组织化学染色时表现出良好的染色，但不能通过流式细胞仪染色，但它们很难分离。当前，正在进行实验，目的是通过对整个CD45阴性基质细胞进行分类和单细胞分析，以获取整个胸腺基质细胞（包括成纤维细胞）的转录组信息。为了进行“ I-B：通过质量显微镜对MEFA进行小分子映射”，在质量显微镜下分析了胸腺组织。使用多个矩阵重复测量，并将磷脂酰丝氨酸（36：1）和氧化氧化盐鉴定为髓质中存在的小分子化合物的候选物。此外，在第51届免疫学会学术会议上（2022年12月，库曼托）报告了上述一些结果。

项目成果

The novel CD103- dendritic cell-like subset found in rat thymus.

在大鼠胸腺中发现的新型 CD103-树突状细胞样亚群。

• 发表时间: 2022
• 作者: Yasushi Sawanobori;Hisashi Ueta;Yusuke Kitazawa;and Nobuko Tokuda
• 通讯作者: and Nobuko Tokuda