経口減感作による組換えAAVの発現効率の改善―筋ジストロフィー治療を目指して

通过口服脱敏提高重组AAV表达效率——瞄准肌营养不良症治疗

• 批准号: 22K06064
• 负责人: 石井 亜紀子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06064/
• 关键词: 遺伝子治療; 経口免疫寛容誘導法; AAV; 筋ジストロフィー; カニクイザル; 羊膜由来間葉系幹細胞

デュシェンヌ型筋ジストロフィー（DMD）は，臨床的には高度の筋力低下・筋萎縮，病理学的には骨格筋の変性・壊死を引き起こす平均寿命28歳の重篤な遺伝性疾患である. 根本的な治療法はなく，効果的な遺伝子治療が必要である. これまで応募者の研究グループは，骨格筋に遺伝子を効率的に導入できる組換えアデノ随伴ウイルス（rAAV）を開発し，小型化されたマイクロジストロフィン遺伝子を使用してその治療の可能性を検討してきた．その結果，AAV遺伝子治療成功の鍵となるのは免疫反応のコントロールであることを明らかにし，安全な免疫反応のコントロール法の開発が遺伝子治療の臨床応用に必須であると考えた．免疫抑制剤であるタクロリムスの使用により、導入遺伝子の発現を延長できるという研究結果はすでに報告しているが、さらに安全性の高い免疫寛容を誘導する必要があると考え、本研究を計画した。将来のDMDの遺伝子治療を目標として，非ヒト霊長類にて羊膜由来間葉系幹細胞による経口減感作により免疫寛容誘導を行い，導入遺伝子発現を持続させるため、当該年度は、遺伝子導入用のrAAVベクターの大量調整を完了した。免疫寛容を誘導するための羊膜由来間葉系幹細胞は、KANEKAより共同研究として供与されるため、実験を行う直前に着実に培養できるように、セットアップを完了した。また、カニクイザル（3-4歳）10頭からcell based assay法により中和抗体を測定し、遺伝子導入に用いるカニクイザル3頭の選別を終了した。また、組み換えDNA実験の承認も得られたので、カニクイザルへの投与に向けての準備が完了した。

Dushenne型肌肉营养不良（DMD）是一种28岁的严重遗传性疾病，在临床上是高度的肌肉无力，肌肉萎缩，并且在病理上导致骨骼肌肉退化和坏死。到目前为止，申请人的研究小组已经开发了一个伴随的腺病（RAAV），可以有效地在骨骼肌肉中引入基因，并且已经进行了小型化。结果，AAV基因治疗成功的关键是控制免疫反应，而安全免疫反应控制方法的发展对于遗传治疗的临床应用至关重要。研究已经报道说，使用免疫抑制剂Taklorimus可以扩展引入基因的表达，但是我们计划了这项研究，假设有必要诱导更安全的免疫耐受性。为了在未来提供DMD的遗传处理，在非人类灵长类动物中，基于口服的Molle相关干细胞提供了免疫耐受性，以维持引入的基因表达，因此该年份用于基因引入调整已经完成。已经建立了该设置，以便Kaneka作为一项协作研究，以诱导免疫力的基于氨基孔的中叶干细胞。此外，基于细胞的测定方法是从10个螃蟹Zizal（3-4岁）测量的，并终止了用于基因引入的3种蟹肉的排序。此外，还获得了重组DNA实验的批准，因此完成了对螃蟹Zizal的给药的准备。