新奇構造を有する高純度リポテイコ酸の免疫応答に関する研究

新型结构高纯度脂磷壁酸的免疫反应研究

• 批准号: 22K05494
• 负责人: 白石 宗
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05494/
• 关键词: L. gasseri; L. paragasseri; リポテイコ酸; ポストバイオティクス; 乳酸菌; Lactobacillus gasseri; 免疫応答

本研究では、申請者が過去に報告した腸管乳酸菌Lactobacillus gasseri およびLactobacillus paragasseri のLTAにおいて観察される新奇の部分構造や多くの乳酸菌に共通の構造に対して、「これらの新奇の部分構造を有するLTAは、一般的な構造のLTAと異なる免疫誘導活性を示すのか？」という問いに、これらのLTAの宿主に対する免疫誘導因子としての特徴を明らかにすることが目的である。さらに、免疫誘導活性を評価する上で、LTA画分への夾雑物の混入が問題となっているため、高純度のLTA画分の取得方法を確立する。今年度は以下の成果が得られた。L. gasseri JCM 1131T および比較対象として Lactococcus lactis JCM 16167T、Staphylococcus aureus ATCC 10832 を使用してLTAを抽出した。その結果。L. gasseri JCM 1131T のLTAとしてグリセロールリン酸モノマーユニットの54%がアラニン置換されたポリマーと四糖、三残基のアシル基を有するアンカー糖脂質が確認された。一方で、精製画分には5-10%の多量のタンパク質も検出された。S. aureus ATCC 10832 のLTAでは、グリセロールリン酸モノマーユニットの28%がアラニン置換されたポリマーと二糖、二残基のアシル基を有するアンカー糖脂質が確認された。L. lactis JCM 16167T のLTAは1H-NMRのスペクトルが得られず、タンパク質の混入も多量だったため、精製が出来ていないと判断してHICカラムの交換を行い、再度精製を実施する予定である。今後は、各菌株から得られたLTA画分のLPS、タンパク質、核酸の定量を行った後、再精製 (各種楮処理および再HIC) によって高純度のLTA画分を回収する。

在本研究中，我们研究了申请人之前报道过的肠乳酸菌加氏乳杆菌和副加氏乳杆菌的LTA中观察到的新亚结构，以及许多乳酸菌共有的结构。本研究的目的是阐明这些亚结构。这些 LTA 作为宿主免疫诱导因子的特征。此外，由于在评估免疫诱导活性时LTA级分的污染是一个问题，因此我们将建立一种获得高纯度LTA级分的方法。今年取得了以下成果。使用 L.gasseri JCM 1131T、乳酸乳球菌 JCM 16167T 和金黄色葡萄球菌 ATCC 10832 作为比较目标提取 LTA。结果。 L.gasseri JCM 1131T的LTA被证实是一种聚合物，其中54％的磷酸甘油单体单元被丙氨酸、四糖和具有三个酰基的锚定糖脂取代。另一方面，在纯化的级分中也检测到大量的蛋白质（5-10%）。金黄色葡萄球菌ATCC 10832的LTA证实了其中28％的磷酸甘油单体单元被丙氨酸、二糖和具有两个酰基的锚定糖脂取代的聚合物。由于无法获得乳酸乳球菌JCM 16167T的LTA 1H-NMR谱，并且存在大量蛋白质污染，因此我们确定纯化未完成，计划更换HIC柱并再次进行纯化。 。今后，对从各菌株获得的LTA组分中的LPS、蛋白质和核酸进行定量后，我们将通过再纯化（各种桑树处理和re-HIC）收集高纯度的LTA组分。