3種のテトラスパニン標識EVの阻害剤探索と阻害プロファイルによる制御機構の解明

寻找三类四跨膜蛋白标记的 EV 的抑制剂并根据抑制谱阐明控制机制

• 批准号: 22K05434
• 负责人: 青木 玲奈
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Aichi Cancer Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05434/
• 关键词: 細胞外小胞; テトラスパニン; スクリーニング; 阻害剤; エクソソーム; がん

細胞が分泌する脂質二重膜に囲まれた微粒子のエクソソーム（small EV：sEV）を含む細胞外分泌小胞（EV）は、不均一で多彩な生成機構と分泌機構が複雑に絡み合い、未だ未解明な点が多い。本研究の目的は「1. がん特異的に制御されるテトラスパニン標識EVを個別に制御する阻害剤を見出す」「2. がん細胞で阻害剤により分泌制御されたEVの機能性を調べる」「3. 選択的なテトラスパニン標識EVの分泌抑制阻害剤を突破口にして、テトラスパニンによるEVの多様性を生み出す制御機構を明らかにし、EV阻害剤をがん化抑制や治療に貢献させる」ことにある。令和４年度は、EV表面マーカーの代表的なテトラスパニン（CD63/ CD9/ CD81）のルシフェラーゼ融合体を用いたテトラスパニン標識EVの測定法を確立した。阻害剤スクリーニングは、先端モデル動物支援プラットフォームの分子プロファイリング支援活動より、標的既知の標準阻害剤キット（約400阻害剤）の提供を受け、３種類のテトラスパニン標識EVについてそれぞれ解析を行なった。その結果、各阻害剤による３種類のテトラスパニン標識EVの分泌プロファイルの違いが明らかになった。本スクリーニング法は、EV粒子数を反映しているが、実際に測定しているのは過剰発現系での細胞外に分泌されたテトラスパニンの相対数である。そこでテトラスパニンEVのELISAキットを用いて、スクリーニングヒット阻害剤の検証も行った。最終的に「目的３」解明の突破口となり得る特異的な標識テトラスパニン分泌のみに影響を与える阻害剤を含む、EV分泌量を変動させた候補阻害剤を３種類に絞り込むことができた。

包含细胞分泌的脂质双层膜的细胞分泌囊泡（EVS），细胞分泌的脂质双层膜以及异质，多样的产生和分泌机制在许多方面都在许多方面相互交织，并且有许多不清楚的点。这项研究的目的是“ 1。查找抑制剂，这些抑制剂可以单独调节癌症特异性控制的四叠蛋白蛋白标记的EVS”，“ 2。检查癌细胞中抑制剂分泌的EV的功能，并使用“ 3”。使用选择性抑制剂的选择性抑制剂，从而产生了避开型号的探测，从而产生了避免避免的动物，从而促进了散布的不同，从而促进了散布的机制，从而使繁殖的机构造成了繁殖的繁殖，从而使繁殖繁多的疾病繁多的疾病，从而弥补了疾病，从而使繁殖的疾病繁殖，从而弥补了疾病，从而弥补了疾病，从而弥补了疾病，从而弥补了繁殖的疾病，从而弥补了繁殖的疾病，从而产生了这种抑制剂。抑制癌症的发病率和治疗。”在2022年，建立了一种使用四叠蛋白酶（CD63/CD9/CD81）（典型的EV表面标记）的荧光素酶融合来测量四叠素标记的EV的方法。通过高级模型动物支持平台的分子分析支持活性提供了抑制剂筛查，并为三种类型的四叠蛋白蛋白标记的电动汽车分析了三种类型的四叠素标记的EV。结果，揭示了由于每个抑制剂引起的三个四叠蛋白标记的电动汽车的分泌谱差异。尽管这种筛选方法反映了EV颗粒的数量，但实际测量的是在过表达系统中细胞外分泌的四叠蛋白酶的相对数量。因此，我们还将ELISA试剂盒用于四叠腺苷EV来验证筛选命中抑制剂。最后，我们能够缩小具有不同EV分泌水平的候选抑制剂的数量，其中包括仅影响特定标记的四跨膜分泌的抑制剂，这可能是阐明“目标3”的突破。

项目成果

RAB27A発現を制御する新規EV阻害剤の同定

鉴定一种调节 RAB27A 表达的新型 EV 抑制剂

• 发表时间: 2022
• 作者: 上原了;青木（伊藤）玲奈;小根山千歳
• 通讯作者: 小根山千歳