蛍光タンパク質の光褪色過程の解明に向けた光明滅サイクルの過渡応答解析

光闪烁循环的瞬态响应分析以阐明荧光蛋白的光漂白过程

• 批准号: 22K04972
• 负责人: 須田 亮
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo University of Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K04972/
• 关键词: 蛍光タンパク質; 光明滅; 光褪色; 多光子励起; 蛍光顕微鏡; 励起状態吸収

蛍光タンパク質の光褪色現象はさまざまな蛍光観察の障害であり、その改善が切望されている。しかし、詳細は未だ明らかにされておらず、現状では励起光強度を下げて光褪色を避けるなど当座しのぎの対応がとられているに過ぎない。申請者らはこれまで、可逆的な光明滅（ブリンキング）サイクルにおいて、蛍光分子が暗状態に滞留する時間が長いと、見かけ上、光褪色のように振る舞うことを示した。 本研究課題では、この光明滅過程について定量性のある実験をもとに過渡応答特性について解析を行い、光明滅サイクルから離脱して真に光褪色に至る蛍光分子の収率を求めることを目的とする。本年度は、緑色蛍光タンパク質を一光子および二光子で励起することにより、それぞれ光明滅に伴う蛍光強度の過渡応答を観測し、結果を解析して光褪色に至る経路について考察した。

荧光蛋白的光膜现象是各种荧光观察的障碍，并且高度需要改善。但是，尚未透露细节，目前已经采取了通过减少光褪色来防止激发光强度的措施。申请人先前已经表明，在可逆的闪烁周期中，荧光分子长期保持在黑暗中时的行为就像光的褪色。该研究主题旨在根据定量实验分析此闪烁过程的瞬态响应特征，并确定从闪烁周期中逃脱并导致真正的光褪色的荧光分子的产率。今年，通过对具有单光子和两光子的绿色荧光蛋白激发，我们观察到与光闪烁相关的荧光强度的瞬时响应，并分析了结果以考虑导致光褪色的途径。