Cartilage protection by mechanical stress - changes of Exosome contents-

机械应力对软骨的保护-外泌体含量的变化-

• 批准号: 19K09627
• 负责人: 大月 孝志
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: National Defense Medical College (2023)Okayama University (2019-2020)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-11-15 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19K09627/
• 关键词: エクソソーム; メカノセンサー; マトリックス; 軟骨細胞; miRNA; 変形性関節症; 細胞外小胞; 炎症性サイトカイン; 軟骨; メカニカルストレス; 細胞外マトリックス

軟骨細胞に対し炎症性サイトカイン（Interleukin-1β（IL-1β））、炎症性サイトカイン＋メカニカルストレスを加え軟骨細胞が培地中に産生するエクソソームを回収し、含有するmiRNA、エクソソーム自身を構成するタンパクを解析する。miRNAの解析はRNA-seqにて行い、エクソソームタンパク構成の解析はマス分析にて行う。miRNA解析に必要なエクソソーム、培養上清の量を割り出しパイロット分析を行っている。また、マス分析でも同様に必要量を割り出しサンプル処理、少量によるパイロット分析まで行っている。また、培養上清から回収したエクソソームを軟骨細胞の培養液に添加して軟骨細胞の再生するマトリックス分解酵素、マトリックス構成成分の発現量の変化をRT-qPCR法にて検出した。現時点では無処理の軟骨細胞培養上清、サイトカインした軟骨細胞培養上清における作用に違いは見られていない。回収したエクソソームは容易に凝集体を形成することが粒子径分布測定で確認されている。粒子径分布と粒子数の両方を揃えることでより正確にサイトカイン処理によるエクソソームの作用の変化を議論する必要があることが分かってきた。細胞レベルでのエクソソームの変化を見出した後に、ラット変形性関節症モデルにエクソソームを投与することで、臨床応用の為の基礎データを収集する予定である。詳細な解析を行うには更に多くの培養上清、培養期間が必要となるが、以降は海外留学より帰国してから再開したい。

炎性细胞因子（白介素-1β（IL-1β），炎症细胞因子和机械应激被应用于软骨细胞中，以收集培养基中软骨细胞产生的外泌体，并分析外粒本身中包含的miRNA。使用RNA-Seq进行miRNA分析，并使用质量分析分析外泌体蛋白组成。确定miRNA分析所需的外泌体和培养上清液的量，并进行初步分析。另外，在质量分析中还确定了所需的数量，并执行样品处理，并使用少量进行了试点分析。此外，将从培养上清液中收集的外泌体添加到软骨细胞的培养基中，并通过RT-QPCR检测到基质降解酶和基质成分的表达水平的变化。目前，在未处理的软骨细胞培养上清液和细胞因子软骨细胞培养上清液的影响中尚未观察到差异。通过粒度分布测量，已确认收集的外泌体很容易形成聚集体。通过使粒度分布和颗粒数量对齐，很明显，有必要更准确地讨论因细胞因子治疗而导致的外泌体作用的变化。在细胞水平发现外泌体变化后，将通过将外泌体给大鼠骨关节炎模型来收集临床应用。详细分析需要更多的文化上清液和文化时期，但是从现在开始，我想在出国留学后返回日本后恢复研究。

项目成果

変形性関節症に有効な新規化合物の探索

寻找有效对抗骨关节炎的新化合物

• 发表时间: 2020
• 作者: 中野 愛梨;稲垣純子;大月孝志;兒玉慎太郎;オメル・F・ハティポ-ル;池村 健太郎;安藤 亮典;畑本 早紀子;立木美穂;ガブリエル オポク;西田圭一郎;廣畑 聡
• 通讯作者: 廣畑 聡

IL-1beta treatment up-regulated CD9 in exosome and chondrocyte

IL-1β治疗上调外泌体和软骨细胞中的CD9

• 发表时间: 2019
• 作者: Yan Wanyu;Shintaro Kodama;Liu Guole;Takashi Ohtsuki;Omer Faruk Hatipoglu;Takuto Nishimura;Miho Tachiki;Junko Inagaki;Hiroshi Yamada;Takayuki Furumatsu;Keiichiro Nishida;Liankun Sun;Satoshi Hirohata
• 通讯作者: Satoshi Hirohata

Critical role of ADAMTS1 in the development of ventral wall

ADAMTS1 在腹壁发育中的关键作用

• 发表时间: 2019
• 作者: Chang Lu;Omer Faruk Hatipoglu;Takuto Nishimura;Miho Tachiki;Junko Inagaki;Takashi Ohtsuki;Liankun Sun;Satoshi Hirohata
• 通讯作者: Satoshi Hirohata

Isolation and functional screening of osteoarthritis related miRNA

骨关节炎相关miRNA的分离及功能筛选

• 发表时间: 2019
• 作者: Miho Tachiki;Omer faruk Hatipogl;Takashi Ohtsuki;Junko Inagaki;Takuto Nishimura;Yuka Ooka;Kentaro Ikemura;Chang Lu;Yan Wanyu;Satoshi Hirohata
• 通讯作者: Satoshi Hirohata

The Mechanism of Cardioprotective Effect of Eosinophil Cationic Protein in Anticancer Drug- induced Cardiotoxicity Model

抗癌药物心脏毒性模型中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白的心脏保护作用机制

• 发表时间: 2020
• 作者: Takuto Nishimura;Miho Tachiki;Takashi Ohtsuki;Junko Inagaki;Kentaro Ikemura;Shintaro kodama;Satoshi Hirohata
• 通讯作者: Satoshi Hirohata