Epithelial-immune microenvironment (EIME) in alopecia areata

斑秃的上皮免疫微环境（EIME）

• 批准号: 21K08348
• 负责人: 加来 洋
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kurume University (2023)Kyoto University (2021-2022)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-11-15 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08348/
• 关键词: 円形脱毛症

本研究プロジェクトでは、円形脱毛症の病態解明と治療法開発を目指して、PARP1の発現とその関与に焦点を当てて取り組んできた。円形脱毛症は、頭皮の局所的な脱毛が特徴であり、患者のQOLに大きく影響する疾患である。現在の治療法は限定的であり、病態の詳細が解明されていないため、効果的な治療法開発のための研究が求められてる。PARP1はDNA修復機構に関与する酵素であり、その異常な発現が様々な疾患の発症に関連していることが報告されている。円形脱毛症とPARP1の関連性を明らかにすることで、新たな治療ターゲットの発見につながる可能性がある。本研究では、当院の円形脱毛症患者3症例のホルマリン固定パラフィン包埋ブロックから新たに切り出した組織標本を用い、免疫組織化学的手法でPARP1の発現を検討した。免疫染色の条件検討では、標本の前処理、抗体の希釈率、インキュベーション時間、検出系の最適化の検討を行った。また、ポジティブコントロールとして、膵管内管状腫瘍の切除検体の正常膵臓部の切片および扁桃炎の摘出標本を使用し、検討条件下での染色の妥当性を検証した。100%キシレン×３回を各5分、100%EtOH×２回、90%、80%、70%、PBSに各1分処理を行い、パラフィン切片を作成し、続いて抗原の不活化を行った。後にBlockingを行い、次に一次抗体反応を行った。その後二次抗体反応をアルカリフォスファターゼを使用し行った（一次抗体のホストはMouseを使用した）。

在这个研究项目中，我们重点关注PARP1的表达及其参与，旨在阐明斑秃的病理学并开发治疗方法。斑秃以头皮局部脱发为特征，是一种极大影响患者生活质量的疾病。目前的治疗方法有限，并且病理学细节尚未阐明，因此需要研究来开发有效的治疗方法。 PARP1是一种参与DNA修复机制的酶，其异常表达已被报道与多种疾病的发病有关。阐明斑秃和 PARP1 之间的关系可能会导致新的治疗靶点的发现。在这项研究中，我们使用免疫组织化学技术，使用从我们医院三名斑秃患者的福尔马林固定石蜡包埋块上新鲜切下的组织标本，检测了 PARP1 的表达。在检查免疫染色的条件时，我们检查了样本预处理、抗体稀释率、孵育时间和检测系统的优化。此外，作为阳性对照，使用胰腺导管内管状肿瘤切除标本和扁桃体炎切除标本的正常胰腺区域切片来验证研究条件下染色的有效性。 100%二甲苯3次，每次5分钟，100%EtOH 2次，90%、80%、70%、PBS各1分钟，制备石蜡切片，然后灭活抗原。然后进行封闭，然后进行一抗反应。此后，使用碱性磷酸酶进行二抗反应（使用小鼠作为一抗宿主）。