Investigation of the mechanism of nucleic acid metabolism to establish a a new therapeutic strategy.

研究核酸代谢机制以建立新的治疗策略。

• 批准号: 21K19566
• 负责人: 北村 幸子
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19566/
• 关键词: 核酸代謝; ピリミジン塩基; 核酸合成阻害; 葉酸受容体; 5FU; 卵巣癌; ピリミジン合成阻害

RNA, DNA合成の直接的な要素となる、デオキシリボースが付加した核酸（dNTP）を、qPCRを応用した手法で定量化する方法の確立に、引き続き今年度取り組んだ。昨年度に引き続いて、米国やハンガリーで同様の測定を行っている研究グループと、何度もweb会合を開いて再現性のある手法の確立に努めた。その結果、次第に精度が上昇しつつあるが、精密な定量が毎回可能、という状況には至っていない。機器の更新も行ったが、それだけでは十分でないことが判明した。具体的には、試薬や機器など細かな要因の積み重ねにより、厳密な定量が困難となることが判明した。しかしながら、厳密ではないものの、半定量とすることは多くの場面で可能となってきたため、化学療法を行った際の核酸（dNTP）の動態についてプレリミナリーに検討をおこなった。その結果、細胞障害性薬剤の添加により、dCTP, dTTPが増加する可能性が示唆された。これまで同様の動態は、乳癌細胞株で確認されているだけで、卵巣癌細胞での試みは初めてであり、興味深い結果であると考えている。加えて、核酸の原料である葉酸受容体が、卵巣がんでは高く発現していることが報告され、我々のサンプルでも確認できた。葉酸受容体の阻害により、卵巣癌細胞の増殖が低下することを示唆するデータも得ることができた。葉酸受容体の拮抗で、より幅広い核酸合成の低下が期待され、その解明を計画している。

今年，我们继续努力建立一种使用 qPCR 的方法来定量脱氧核糖添加核酸 (dNTP)（RNA 和 DNA 合成的直接成分）的方法。从去年开始，我们与在美国和匈牙利进行类似测量的研究小组举行了多次网络会议，努力建立可重复的方法。因此，准确度逐渐提高，但我们还没有达到每次都可以精确量化的情况。他们也更新了装备，但结果发现还不够。具体来说，我们发现由于试剂和设备等小因素的结合，精确定量很困难。然而，尽管并不严格，但在许多情况下半定量已成为可能，因此我们初步研究了化疗过程中核酸（dNTP）的动态。结果表明，添加细胞毒性药物可能会增加 dCTP 和 dTTP。迄今为止，类似的动态仅在乳腺癌细胞系中得到证实，但这是第一次在卵巢癌细胞中进行尝试，我们相信这些都是有趣的结果。此外，据报道，作为核酸原料的叶酸受体在卵巢癌中高表达，这在我们的样本中也得到了证实。我们还获得了表明抑制叶酸受体可减少卵巢癌细胞增殖的数据。叶酸受体的拮抗作用预计会导致核酸合成更广泛的减少，我们计划阐明这一点。