Causative effect of phosphate groups on the allergenicity of casein components: Improvement of diagnostic accuracy for milk allergy.

磷酸基团对酪蛋白成分致敏性的影响：提高牛奶过敏的诊断准确性。

• 批准号: 21K13505
• 负责人: 内藤 宙大
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Nagoya University of Arts and Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K13505/
• 关键词: 牛乳アレルギー; カゼインホスホペプチド; カゼイン; 脱リン酸化; 抗体結合能; アレルゲン性; リン酸基

本研究では、カゼインホスホペプチド（CPP）及びカゼインを脱リン酸化することで抗体結合能及びアレルゲン性が変化するかどうかを検討することを目的とした。令和４年度は、CPP及びカゼインをアルカリホスファターゼにより脱リン酸化処理させた試料を用いて抗体結合能を解析した。試料の脱リン酸化の程度は、Phos-tag SDS-PAGEにて確認した。脱リン酸化されたことを確認した試料を用いて阻害ELISAを行った。その結果、anti-casein rabbit IgG、牛乳アレルギー患者血清中IgEともに、脱リン酸化により抗体結合能が低下した。また、anti-casein rabbit IgGにおいて、試料の脱リン酸化の程度が大きいほど抗体結合能が低下した。さらに、エピトープとして重要な領域だと仮説だてたSSSEEを含むアミノ酸配列の合成ペプチドをリン酸基の有るものと無いもので作製し、ドットブロット及び阻害ELISAにて抗体結合能を解析した。その結果、リン酸基のあるペプチドで反応が強く、リン酸基のないペプチドでは反応がほとんどみられなかった。これらの結果から、カゼイン及びCPPの抗体反応にはアミノ酸配列中のSSSEEのリン酸基が重要な役割を果たしていることが示唆された。令和５年度は、上記の実験について、耐性獲得患者血清や遷延するアレルギー患者血清のIgG4抗体を用いて同様の解析を試みる。さらに、カゼインを食品加工することで脱リン酸化できないか検討し、乳加工食品の低アレルゲン化を目指す。

本研究的目的是检查酪蛋白磷酸肽 (CPP) 和酪蛋白的去磷酸化是否会改变抗体结合能力和过敏性。 2020年度，使用碱性磷酸酶去磷酸化的CPP和酪蛋白样品分析了抗体结合能力。通过Phos-tag SDS-PAGE确认样品的去磷酸化程度。使用确认去磷酸化的样品进行抑制 ELISA。结果，牛奶过敏患者血清中抗酪蛋白兔IgG和IgE的抗体结合能力因去磷酸化而降低。此外，在抗酪蛋白兔IgG中，样品的去磷酸化程度越大，抗体结合能力越低。此外，还制备了含有和不含有磷酸基的SSSEE氨基酸序列的合成肽，该合成肽被假设为作为表位的重要区域，并使用斑点印迹和抑制ELISA分析了它们的抗体结合能力。结果，具有磷酸基团的肽的反应强烈，而与不具有磷酸基团的肽几乎没有观察到反应。这些结果表明氨基酸序列中SSSEE的磷酸基团在酪蛋白和CPP的抗体反应中起重要作用。在 2020 财年，我们将尝试使用来自获得性耐药患者血清和持续过敏患者血清中的 IgG4 抗体对上述实验进行类似分析。此外，我们将研究是否可以通过食品加工对酪蛋白进行去磷酸化，以降低加工乳制品的过敏性。

项目成果

Serine phosphate group in casein phosphopeptide is crucial for IgE binding to αs1-casein

酪蛋白磷酸肽中的丝氨酸磷酸基对于 IgE 与 αs1-酪蛋白的结合至关重要

• DOI: 10.1016/j.alit.2023.02.001
• 发表时间: 2023
• 期刊: Allergology International
• 影响因子: 6.8
• 作者: Naito Michihiro;Matsui Teruaki;Ito Komei;Izumi Hidehiko
• 通讯作者: Izumi Hidehiko

Putative allergic reactivity of casein phosphopeptide in severe cow’s milk allergy patients

严重牛奶过敏患者酪蛋白磷酸肽的推定过敏反应

• DOI: 10.1111/pai.13752
• 发表时间: 2022
• 期刊: Pediatric Allergy and Immunology
• 影响因子: 4.4
• 作者: Matsui Teruaki;Naito Michihiro;Kitamura Katsumasa;Makino Atsushi;Takasato Yoshihiro;Sugiura Shiro;Izumi Hidehiko;Ito Komei
• 通讯作者: Ito Komei