Development of therapeutic application of beating cardiomyocytes derived from human adipose tissue for treating heart failure

源自人类脂肪组织的跳动心肌细胞治疗心力衰竭的治疗应用的开发

基本信息

批准号：
21K12681
负责人：
高島伸一郎
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の学術的な「問い」は、「SVFに心筋誘導遺伝子Mef2cを導入したMef2c強発現SVFの投与が慢性虚血性心不全を改善させるか」、また「ヒトSVFもMef2cの導入により拍動心筋細胞に分化するか」である。検討1. ヒト臨床皮下脂肪サンプルを用いて、ヒトSVFを拍動心筋細胞に分化誘導させる方法を確立する。待機外科手術患者20例を対象に、手術時に生じた余剰皮下脂肪を採取。コラゲナーゼ処理ならびに遠心分離によりヒトSVFを得る。培養ディッシュにSVFを播種後、第5日目にレンチウイルスベクターを用いて、“心筋誘導遺伝子”MEF2Cを導入。28日後に分化誘導された「ヒト拍動心筋」特性について解析を行う。今年度は新型コロナウイルス感染症流行の影響で、新規患者のエントリーが滞った。来年度は引き続き症例を積み重ねていく予定である。検討2.ラット慢性虚血性心不全モデルにおける“心筋分化誘導遺伝子導入”SVF投与の心機能改善効果を明らかにする。αMHC-GFP Tgマウスの皮下脂肪からSVFを採取し、in-vitro で①PBS, ②SVF,③SVF+Mef2cの3群に分け、細胞播種後第5日目にそれぞれの「心筋分化誘導遺伝子」をレンチウイルスベクターを用いて導入する。day 10に回収、genetically-primed SVFを得る。野生型ラットに虚血再灌流モデルを作成し、4週後にgenetically-primed SVFを心筋虚血リスク領域の心筋内に直接投与する。細胞投与４週、８週後に心機能評価、組織評価を行い、心筋分化誘導遺伝子導入SVFの心機能改善効果、ホストにおける移植後in-vivo心筋分化効率を評価する。令和４年度はαMHC-GFP Tgマウスの繁殖が順調に進んだ。令和５年度は当初予定した実験を遂行できる見込みである。

这项研究中的学术“问题”是“在SVF中诱导表达MEF2C的SVF的SVF会改善慢性缺血性心力衰竭吗？”和“人类SVF还会通过引入MEF2C来区分脉冲心肌细胞吗？”考虑1。建立一种使用人类临床皮下脂肪样品诱导人类SVF分化为击败心肌细胞的方法。手术期间产生的皮下脂肪过多，是从20名选修手术患者中收集的。人类SVF是通过胶原酶处理和离心得出的。将SVF播种到培养皿中后，在第五天使用慢病毒载体引入了“心肌诱导基因” MEF2C。 28天后在分化中诱导的“人类脉动心肌”的特征分析。由于Covid-19爆发的影响，今年的新患者被推迟了。我们计划明年继续积累案件。研究2。为了阐明慢性缺血性心力衰竭大鼠模型中SVF给药“心肌分化诱导的基因转移”的影响。 SVF是从αMHC-GFP TG小鼠的皮下脂肪中收集的，分为三组体外：①PBS，②SVF和③SVF+MEF2C，每种“心肌分化基因诱导的基因”是使用塞子送给细胞播种后的壁臂载体引入的。在第10天收集，并获得一般性的SVF。在野生型大鼠中创建了缺血 - 重新灌注的模型，并直接将遗传学的SVF直接用于心肌缺血风险区域的心肌肌肉。在细胞给药后4和8周进行心脏功能和组织评估，以评估心肌分化诱导的基因转移的SVF的心脏功能改善效应以及植入宿主后心肌分化的效率。在2022年，αMHC-GFP TG小鼠稳步繁殖。预计最初计划的实验将在2023财年进行。