マウス正常造血器細胞を用いたヒトがん関連遺伝子の新たな探索法の確立

利用小鼠正常造血细胞建立人类癌症相关基因搜索新方法

基本信息

批准号：
22659184
负责人：
瀬戸加大
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22659184/
关键词：
悪性リンパ腫染色体転座ゲノム異常 CCND1 BCL2 MYC

项目摘要

本研究の目的は、がん化に伴うゲノム異常の協調的役割を検討するための新しい実験系の基盤形成を試みることにある。発想の原点はTriple hitと呼ばれるCCND1,BCL2,MYCの3種類の染色体転座を同時に持つ悪性度の高いリンパ腫患者が存在する事実である。これらの染色体転座は単独でも存在するが異なる悪性リンパ腫を形成する。3つの異なる染色体異常が同一患者に存在することは、これらの遺伝子の制御異常発現が協調的に働きがん化に働いていることを意味する。そこで、マウス正常造血器細胞の長期培養系を用いて、これらの3遺伝子を導入したところ、Feeder非依存性IL7非依存性の増殖を認めることが明らかとなった。この実験系を用い、CCND1遺伝子を欠く、BCL2,MYC導入培養細胞に、B細胞性細胞株から作成した発現ライブラリーを感染させ、CCND1の代わりに機能する遺伝子の単離を試みたところ、再現性を持って、変異RAS遺伝子とCCND3が得られた。CCND3はCCND1と発現様式が異なるものの、機能的には補完しうることが知られている。また、我々はこれまで、コピー数異常の領域の責任遺伝子としてCCND3を報告しており、がん化に関わることが知られている。また、公開データベースの探索から、BCL2とMYCのTwo hit転座を持つ患者にはCCND3が過剰発現されていることも明かとなった。これらの実験結果から、本実験系は有効に機能することを明らかにすることができた。問題点としては、培養系では特定の遺伝子のみがとれてくること、また、コロニー形成能は必ずしも感度の高いアッセイ系とはいえないことが明らかとなった。今後は、マウスを用いたin vivoのスクリーニング系も試してみることが必要である。予備実験では有効に機能することが示されつつある。また、BCL2,MYC以外の組み合わせでも同様の試みを行うことも重要な必要であるが、極めて有用な新たな機能実験のための基盤が確立できたことは意義が深い。

本研究的目的是试图建立一个新的实验系统的基础，以检查与癌变相关的基因组异常的协同作用。这个想法的起源是这样一个事实：有高度恶性淋巴瘤的患者存在三种类型的染色体易位，CCND1、BCL2和MYC，被称为三重打击。尽管这些染色体易位独立存在，但它们形成不同的恶性淋巴瘤。同一患者存在三种不同的染色体异常意味着这些基因的表达失调以协调的方式导致癌症。因此，当将这三个基因引入小鼠正常造血细胞的长期培养系统时，发现观察到不依赖饲养层和不依赖IL7的增殖。使用该实验系统，我们用B细胞系创建的表达文库感染BCL2、MYC引入的缺乏CCND1基因的培养细胞，并试图分离出代替CCND1起作用的基因，并获得了CCND3。尽管CCND3与CCND1的表达模式不同，但众所周知它们可以在功能上互补。此外，我们之前曾报道CCND3是一个导致拷贝数异常的基因，并且已知它与癌症的发展有关。对公共数据库的搜索还显示，CCND3 在 BCL2 和 MYC 两次易位的患者中过度表达。从这些实验结果中，我们能够证明该实验系统有效运行。已经清楚的是，问题在于使用培养系统只能获得特定基因，并且菌落形成能力的测定系统不一定高度敏感。未来，有必要尝试使用小鼠进行体内筛选系统。初步实验表明它有效。尽管使用 BCL2 和 MYC 以外的组合进行类似的实验很重要，但重要的是我们为极其有用的新功能实验奠定了基础。