真の性決定遺伝子Sry-Tよる性決定の転写制御メカニズムの解明

真正的性别决定基因Sry-T阐明性别决定的转录控制机制

• 批准号: 21K19262
• 负责人: 黒木 俊介
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19262/
• 关键词: 性決定

転写因子が標的遺伝子を活性化または抑制する際には、各々が標的に応じた適切な結合パートナーと複合体を形成することが重要である。ほ乳類Y染色体上の遺伝子Sryは、雄への分化を誘導する性決定のマスター転写因子である。しかし、1991年にSryが発見されてから約30年が経つにも関わらず、Sryが雄分化を誘導する際の機能的な結合パートナーは未だに同定されていない。本研究では、真の性決定遺伝子Sry-Tと結合するタンパク質をBioID法で同定し、Sry-Tによる性決定の転写制御メカニズムの解明することを目的とする。今年度は、Biotin化酵素AirIDをSry-T遺伝子座にノックインしたマウスを作製した。しかし、このマウスは雄から雌への性転換の表現型を示し、系統を樹立することが出来なかった。そこで、代替案として、Biotin化酵素TurboIDを連結したSry-T (Sry-T-TurboID)またはNLSを付加したTurboID (TurboID-NLS)を強制発現するES細胞株を樹立した。これらの細胞を用いてBioIDによるMS解析で相互作用タンパク質を同定し、Sry-T-TurboIDとTurboID-NLSのスコア比からSry-Tに特異的に相互作用するタンパク質のリストを作成した。得られた遺伝子リストを、申請者が既に取得している胎生11.5日生殖腺の遺伝子発現データと照合し、特に生殖腺に発現するSry-T結合クロマチン因子の候補として2つの遺伝子を特定した。

当转录因子激活或抑制靶向基因时，每个形成适当的结合伴侣和复合物很重要。粉刺y染色体基因SRY是性别确定的主要转录因子，可诱导分化为雄性。但是，尽管SRY在1991年被发现，但尚未确定SRY诱导男性化的功能结合伴侣。在这项研究中，目的是确定通过生物分子方法与真实性确定基因T结合的蛋白质，并通过SRY-T阐明性别确定的转移控制机制。今年，一只小鼠将生物素化学酶撞向SRY-T基因。但是，小鼠表示从雄性到女性的一种性别变化，无法建立系统。因此，作为替代方案，具有强迫表达SRY-T（SRY-T-Turboid）或涡轮（涡轮NL）的ES细胞库存，其sry-t（sry-t-turboid）连接到生物素酶涡轮增压。使用这些细胞，通过MS分析通过Bioid鉴定了相互作用蛋白，并创建了与SRY-T-Turboid和Turboid-NLS的得分比专门相互作用的蛋白质列表。获得的基因清单由申请人已经获得的胎儿的基因表达数据组成，并且将两个基因鉴定为SRY-T结合染色质因子的候选者，尤其是在生殖腺中。

项目成果

全能性獲得における母性H3K9脱メチル化酵素 Jmjd1a/bの解析

母体 H3K9 去甲基化酶 Jmjd1a/b 在全能性获得中的分析

• 发表时间: 2021
• 作者: Masakazu Hashimoto;Rui Shibata;Karin Konno;Hiroshi Sasaki;Yuuki Shikaya;黒木俊介
• 通讯作者: 黒木俊介